| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-21页 |
| ·核苷酸的简介 | 第11页 |
| ·核苷酸的应用 | 第11-12页 |
| ·核苷酸可作为添加剂 | 第11页 |
| ·核苷酸可促进生长发育 | 第11-12页 |
| ·核苷酸可提高免疫力 | 第12页 |
| ·核酸类药物的研究现状 | 第12-15页 |
| ·核苷类药物的作用机理 | 第13页 |
| ·抗病毒的核酸类药物 | 第13-14页 |
| ·抗肿瘤的核酸类药物 | 第14-15页 |
| ·胸苷激酶的概况 | 第15-16页 |
| ·聚磷酸激酶的概况 | 第16-17页 |
| ·ATP再生的研究现状及意义 | 第17-18页 |
| ·ATP再生的方法 | 第18页 |
| ·ATP再生的意义 | 第18页 |
| ·研究的目的意义及流程 | 第18-21页 |
| 第2章 胸苷激酶和聚磷酸激酶基因的克隆重组 | 第21-33页 |
| ·材料与方法 | 第21-28页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第21-25页 |
| ·化学试剂 | 第21-22页 |
| ·生物试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基配方 | 第23页 |
| ·克隆用缓冲液 | 第23-24页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第25页 |
| ·菌种保藏 | 第25页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第25页 |
| ·DNA琼脂糖电泳检测 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳回收 | 第25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| ·质粒小量制备 | 第26页 |
| ·DNA的酶切 | 第26页 |
| ·DNA的连接 | 第26页 |
| ·PCR聚合酶链式反应 | 第26-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-32页 |
| ·DTK重组菌株和DPK重组菌株的构建 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增基因 | 第28页 |
| ·克隆质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·表达质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·串联共表达重组菌株DKK的构建 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增基因 | 第31页 |
| ·串联共表达质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第3章 重组菌株的诱导表达 | 第33-41页 |
| ·材料和方法 | 第33-36页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第33-35页 |
| ·其他化学试剂 | 第33页 |
| ·缓冲液 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE所用试剂 | 第34-35页 |
| ·凝胶的配制 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-36页 |
| ·重组菌诱导表达 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE电泳分析 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第36页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-39页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第36-39页 |
| ·重组菌DTK的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·重组菌DPK的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·串联共表达重组菌DKK的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·重组菌蛋白含量测定 | 第39页 |
| ·小结 | 第39-41页 |
| 第4章 胸苷激酶的酶活分析及转化核苷的研究 | 第41-54页 |
| ·材料和方法 | 第41-43页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第41-42页 |
| ·化学试剂 | 第41-42页 |
| ·缓冲液 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·胸苷激酶活力测定方法 | 第42-43页 |
| ·TR转化率的测定 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-53页 |
| ·胸苷激酶的活力测定 | 第43-49页 |
| ·不同类型酶源的活力比较 | 第45-46页 |
| ·温度对TK酶活力的影响 | 第46-47页 |
| ·pH对TK酶活力的影响 | 第47-48页 |
| ·金属离子对TK酶活力的影响 | 第48页 |
| ·Mg~(2+)浓度对TK酶活力的影响 | 第48-49页 |
| ·胸苷激酶转化核苷的研究 | 第49-53页 |
| ·反应时间对TR转化率的影响 | 第49-50页 |
| ·酶量对TR转化率的影响 | 第50页 |
| ·缓冲液对TR转化率的影响 | 第50-51页 |
| ·ATP浓度对TR转化率的影响 | 第51-52页 |
| ·底物浓度对TR转化率的影响 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第5章 聚磷酸激酶的酶活分析和催化合成ATP的研究 | 第54-61页 |
| ·材料和方法 | 第54页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第54页 |
| ·化学试剂 | 第54页 |
| ·反应缓冲液 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·方法 | 第54页 |
| ·聚磷酸激酶活力测定方法 | 第54页 |
| ·ADP转化率的测定 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-60页 |
| ·聚磷酸激酶的活力测定 | 第54-58页 |
| ·不同类型酶源的活力比较 | 第55-56页 |
| ·温度对PPK酶活力的影响 | 第56页 |
| ·pH对PPK酶活力的影响 | 第56-57页 |
| ·Mg~(2+)浓度对PPK酶活力的影响 | 第57-58页 |
| ·聚磷酸激酶催化合成ATP的研究 | 第58-60页 |
| ·反应时间对ADP转化率的影响 | 第58页 |
| ·酶量对ADP转化率的影响 | 第58-59页 |
| ·底物浓度对ADP转化率的影响 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第6章 应用重组菌株合成胸苷酸的研究 | 第61-64页 |
| ·材料和方法 | 第61页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第61页 |
| ·化学试剂 | 第61页 |
| ·反应缓冲液 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·胸苷酸的合成方法 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-63页 |
| ·应用重组菌DKK合成TMP | 第62-63页 |
| ·应用重组菌DTK和DPK合成TMP | 第63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第7章 结论与展望 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| ·展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |