| 表目录 | 第1-13页 |
| 图目录 | 第13-19页 |
| 中文摘要 | 第19-27页 |
| Abstract | 第27-37页 |
| 第一章 文献综述 | 第37-49页 |
| 1 柑橘全爪螨的为害现状及抗性问题 | 第37页 |
| 2 昆虫(螨)抗性机制的研究 | 第37-39页 |
| 3 细胞色素P450酶系 | 第39-46页 |
| 4 转录组学在昆虫(螨)抗药性研究中的应用 | 第46-47页 |
| 5 昆虫杆状病毒表达系统在P450功能研究中的应用 | 第47-49页 |
| 前言 | 第49-53页 |
| 1 论文的研究背景及意义 | 第49-50页 |
| 2 论文的研究思路与总体框架 | 第50-53页 |
| 第二章 柑橘全爪螨抗药性监测及主要解毒酶活性比较 | 第53-79页 |
| 第一节 柑橘全爪螨四个种群田间抗药性测定 | 第53-57页 |
| 1 材料与方法 | 第53-55页 |
| ·供试螨源 | 第53-54页 |
| ·供试主要试剂和仪器 | 第54页 |
| ·生物测定 | 第54页 |
| ·数据分析 | 第54-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55页 |
| 3 小结 | 第55-57页 |
| 第二节 柑橘全爪螨主要解毒酶活性比较 | 第57-74页 |
| 1 材料与方法 | 第57-63页 |
| ·供试螨源 | 第57页 |
| ·供试主要试剂和仪器 | 第57-58页 |
| ·不同发育阶段螨源的收集 | 第58-59页 |
| ·不同种群螨源的收集 | 第59页 |
| ·柑橘全爪螨的药剂胁迫和诱导 | 第59页 |
| ·主要解毒酶活性测定 | 第59-63页 |
| ·数据分析 | 第63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-73页 |
| ·柑橘全爪螨P450s活性分析 | 第63-68页 |
| ·柑橘全爪螨GSTs活性分析 | 第68-71页 |
| ·柑橘全爪螨CarEs活性分析 | 第71-73页 |
| 3 小结 | 第73-74页 |
| 本章讨论 | 第74-79页 |
| 1 田间种群抗性监测 | 第74-75页 |
| 2 主要解毒酶活性研究 | 第75-79页 |
| 第三章 柑橘全爪螨转录组数据库建立和解毒酶基因的筛选鉴定 | 第79-95页 |
| 1 材料与方法 | 第79-83页 |
| ·供试螨源 | 第79页 |
| ·供试主要试剂(盒)和仪器 | 第79-80页 |
| ·柑橘全爪螨总RNA的提取 | 第80-81页 |
| ·柑橘全爪螨转录组测序及数据分析 | 第81-82页 |
| ·解毒酶基因鉴定及通路分析 | 第82-83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-91页 |
| ·柑橘全爪螨总RNA的提取质量 | 第83页 |
| ·柑橘全爪螨转录组测序情况分析 | 第83-85页 |
| ·功能注释 | 第85-88页 |
| ·柑橘全爪螨解毒酶基因鉴定及通路分析 | 第88-91页 |
| 3 小结 | 第91-92页 |
| 本章讨论 | 第92-95页 |
| 第四章 柑橘全爪螨细胞色素P450及其相关基因的克隆与序列分析 | 第95-153页 |
| 第一节 基于转录组数据的柑橘全爪螨P450基因cDNA的克隆及序列分析 | 第96-137页 |
| 1 材料与方法 | 第96-102页 |
| ·供试螨源 | 第96页 |
| ·供试主要试剂(盒)和仪器 | 第96-97页 |
| ·总RNA提取 | 第97页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第97-99页 |
| ·引物设计 | 第99-100页 |
| ·PCR扩增 | 第100-102页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因序列及系统发育分析 | 第102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-135页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因cDNA全长的获得 | 第102-104页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因cDNA序列的生物信息学分析 | 第104-126页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因同源性分析 | 第126-134页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因系统发育分析 | 第134-135页 |
| 3 小结 | 第135-137页 |
| 第二节 柑橘全爪螨细胞色素P450还原酶和细胞色素b_5基因cDNA的克隆及序列分析 | 第137-148页 |
| 1 材料与方法 | 第137-138页 |
| ·供试螨源 | 第137页 |
| ·供试主要试剂(盒)和仪器 | 第137页 |
| ·总RNA提取 | 第137页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第137页 |
| ·引物设计 | 第137-138页 |
| ·PCR扩增、产物克隆及测序 | 第138页 |
| ·柑橘全爪螨CPR和CYB5基因序列及系统发育分析 | 第138页 |
| 2 结果与分析 | 第138-147页 |
| ·柑橘全爪螨CPR和CYB5基因cDNA序列分析 | 第138-145页 |
| ·柑橘全爪螨CPR和CYB5基因系统发育分析 | 第145-147页 |
| 3 小结 | 第147-148页 |
| 本章讨论 | 第148-153页 |
| 1 细胞色素P450的集团分类及同源结构分析 | 第148-149页 |
| 2 细胞色素P450还原酶和细胞色素b_5的分子生物学特性 | 第149-153页 |
| ·细胞色素P450还原酶 | 第149-150页 |
| ·细胞色素b_5 | 第150-153页 |
| 第五章 柑橘全爪螨细胞色素P450及其相关基因的表达模式研究 | 第153-247页 |
| 第一节 柑橘全爪螨P450基因的表达模式解析 | 第154-227页 |
| 1 材料与方法 | 第154-159页 |
| ·供试螨源 | 第154页 |
| ·供试主要试剂(盒)和仪器 | 第154-155页 |
| ·不同发育阶段螨源的收集 | 第155页 |
| ·药剂胁迫和诱导 | 第155-156页 |
| ·总RNA提取 | 第156页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第156页 |
| ·引物设计及内参基因选择 | 第156-158页 |
| ·引物熔解曲线及扩增效率分析 | 第158页 |
| ·定量PCR | 第158-159页 |
| ·数据分析 | 第159页 |
| 2 结果与分析 | 第159-226页 |
| ·扩增产物熔解曲线及引物扩增效率 | 第159-160页 |
| ·柑橘全爪螨不同发育阶段P450基因的表达模式 | 第160-165页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因对药剂胁迫的响应表达模式 | 第165-214页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因对巴比妥酸钠诱导响应的表达模式 | 第214-226页 |
| 3 小结 | 第226-227页 |
| 第二节 柑橘全爪螨CPR和CYB5基因的表达模式解析 | 第227-238页 |
| 1 材料与方法 | 第227-228页 |
| ·供试螨源 | 第227页 |
| ·供试主要试剂(盒)和仪器 | 第227页 |
| ·不同发育阶段螨源的收集 | 第227页 |
| ·柑橘全爪螨的药剂胁迫和诱导 | 第227页 |
| ·总RNA提取和第一链cDNA合成 | 第227页 |
| ·引物设计及内参基因选择 | 第227页 |
| ·引物熔解曲线及扩增效率分析 | 第227页 |
| ·定量PCR | 第227-228页 |
| ·数据分析 | 第228页 |
| 2 结果与分析 | 第228-237页 |
| ·扩增产物熔解曲线及引物扩增效率 | 第228页 |
| ·柑橘全爪螨不同发育阶段PcCPR和PcCYB5基因的表达模式 | 第228-229页 |
| ·柑橘全爪螨PcCPR和PcCYB5基因对药剂胁迫响应的表达模式 | 第229-235页 |
| ·柑橘全爪螨PcCPR和PcCYB5基因对巴比妥酸钠诱导响应的表达模式 | 第235-237页 |
| 3 小结 | 第237-238页 |
| 本章讨论 | 第238-247页 |
| 1 细胞色素P450基因的表达模式 | 第238-243页 |
| 2 细胞色素P450还原酶和细胞色素b_5基因的表达模式 | 第243-247页 |
| ·细胞色素P450还原酶 | 第243-244页 |
| ·细胞色素b_5 | 第244-247页 |
| 第六章 柑橘全爪螨细胞色素P450基因的真核表达 | 第247-261页 |
| 1 材料与方法 | 第247-252页 |
| ·供试主要试剂盒和仪器 | 第247-248页 |
| ·细胞培养 | 第248-249页 |
| ·PCR扩增及pMD-19T Simple载体构建 | 第249-250页 |
| ·表达载体构建 | 第250-251页 |
| ·细胞转染及病毒株获取 | 第251-252页 |
| ·P450重组蛋白表达及含量测定 | 第252页 |
| 2 结果与分析 | 第252-256页 |
| ·柑橘全爪螨P450基因与pMD-19T Simple重组载体构建 | 第252-253页 |
| ·pFastBac-CYP392A24和pFastBac-CYP392F1重组质粒的构建 | 第253-254页 |
| ·Bacmid-CYP392A24和Bacmid-CYP392F1重组杆粒的构建 | 第254-255页 |
| ·重组杆粒对昆虫细胞的转染 | 第255-256页 |
| ·CYP392A24和CYP392F1重组蛋白的表达及含量测定 | 第256页 |
| 3 小结 | 第256-258页 |
| 本章讨论 | 第258-261页 |
| 第七章 主要结论、创新点及研究展望 | 第261-267页 |
| 1 主要结论 | 第261-264页 |
| ·明确了重庆地区柑橘全爪螨对主要药剂的抗性水平 | 第261页 |
| ·掌握了主要解毒酶系在柑橘全爪螨不同螨态和不同药剂下的活性变化情况 | 第261页 |
| ·构建了柑橘全爪螨全螨态转录组数据库 | 第261-262页 |
| ·筛选鉴定出了柑橘全爪螨主要解毒酶基因和代谢通路信息 | 第262页 |
| ·克隆获得了柑橘全爪螨11个P450基因及CPR和CYB5基因 | 第262-263页 |
| ·解析了P450及CPR、CYB5基因在不同螨态的表达模式 | 第263页 |
| ·明确了P450及CPR、CYB5基因对不同药剂胁迫及诱导的响应模式 | 第263-264页 |
| ·初步构建了柑橘全爪螨P450的真核表达体系 | 第264页 |
| 2 创新点 | 第264-265页 |
| 3 展望 | 第265-267页 |
| 参考文献 | 第267-289页 |
| 在读期间发表论文目录及参研课题情况 | 第289-291页 |
| 致谢 | 第291-294页 |
