| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-14页 |
| ·结冷胶及其生产菌株 | 第10-12页 |
| ·结冷胶概述 | 第10-11页 |
| ·结冷胶的生产菌种及结构特性 | 第11页 |
| ·结冷胶的研究进展 | 第11-12页 |
| ·透明颤菌血红蛋白在发酵工业上的应用 | 第12-13页 |
| ·本论文的研究目的及内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-33页 |
| ·实验材料 | 第14-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14-15页 |
| ·LB液体培养基 | 第14页 |
| ·LB固体培养基 | 第14页 |
| ·保种/平板培养基 | 第14-15页 |
| ·种子培养基 | 第15页 |
| ·发酵培养基 | 第15页 |
| ·透明颤菌平板培养基 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第16-17页 |
| ·主要溶液 | 第17-20页 |
| ·生理生化实验所用试剂 | 第17页 |
| ·CTAB法提取DNA所用溶液 | 第17-18页 |
| ·菌体生长量测定所用溶液 | 第18页 |
| ·电转化所用溶液 | 第18页 |
| ·超声破壁所用溶液 | 第18页 |
| ·SDS-PAGE电泳所用溶液 | 第18-20页 |
| ·实验方法 | 第20-31页 |
| ·结冷胶生产菌种的鉴定 | 第20-21页 |
| ·形态学特征 | 第20页 |
| ·生理生化特征的测定 | 第20-21页 |
| ·分子生物学的鉴定 | 第21页 |
| ·结冷胶发酵相关参数测定 | 第21-23页 |
| ·质量测定方法 | 第21页 |
| ·pH值测定方法 | 第21页 |
| ·生物量的测定方法 | 第21-22页 |
| ·出胶率的测定方法 | 第22-23页 |
| ·摇瓶发酵 | 第23页 |
| ·平板培养 | 第23页 |
| ·种子培养 | 第23页 |
| ·摇瓶发酵培养 | 第23页 |
| ·种子生长曲线的绘制 | 第23页 |
| ·结冷胶产胶曲线的绘制 | 第23页 |
| ·透明颤菌的培养和保藏 | 第23页 |
| ·工程菌的构建 | 第23-31页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·回收目的条带 | 第24-25页 |
| ·质粒提取方法 | 第25页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·克隆载体pEASY-T1-P_(vgb)-VHb的构建 | 第26页 |
| ·表达载体pET32a~((+))-VHb的构建 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·VHb在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第28页 |
| ·电转化菌株JLJ | 第28-29页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第29页 |
| ·蛋白粗提 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE | 第30页 |
| ·VHb活性的测定——CO差光谱法 | 第30页 |
| ·质粒稳定性的分析 | 第30-31页 |
| ·重组菌株的发酵性能的优化 | 第31-33页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第31-32页 |
| ·碳源的优化 | 第31页 |
| ·氮源的优化 | 第31-32页 |
| ·重组菌株发酵条件的优化 | 第32-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-57页 |
| ·结冷胶生产菌株JLJ的相关参数的测定 | 第33-36页 |
| ·结冷胶生产菌株的分类鉴定 | 第33-35页 |
| ·形态学及生理生化特征 | 第33-34页 |
| ·菌株JLJ 16S rDNA序列的测定与分析 | 第34-35页 |
| ·菌株JLJ产胶量的测定 | 第35页 |
| ·溶氧条件对于结冷胶发酵生产的影响 | 第35-36页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因在菌株JLJ中的表达 | 第36-47页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因的克隆及克隆载体pEASY-T1-P_(vgb)-VHb的构建 | 第36-39页 |
| ·表达载体pET32a~((+))_VHb的构建 | 第39-42页 |
| ·表达载体转化E.coli BL21(DE3) | 第42-44页 |
| ·表达载体pEASY-T1-P_(vgb)-VHb电转化菌株JLJ | 第44-45页 |
| ·VHb基因异源表达的检测 | 第45-46页 |
| ·改造菌株及野生菌株发酵性能测定 | 第46-47页 |
| ·pEASY-T1-P-(vgb)-VHb的质粒稳定性 | 第47页 |
| ·重组菌株JLJ-VHB~+发酵工艺的优化 | 第47-57页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第47-51页 |
| ·碳源的优化 | 第47-49页 |
| ·氮源的优化 | 第49-51页 |
| ·结冷胶发酵条件的优化 | 第51-57页 |
| ·种龄对结冷胶产量的影响 | 第51页 |
| ·接种量对结冷胶产量的影响 | 第51-52页 |
| ·发酵时间对结冷胶产量的影响 | 第52页 |
| ·初始pH值对结冷胶产量的影响 | 第52-53页 |
| ·培养温度对结冷胶产量的影响 | 第53-54页 |
| ·转速对结冷胶产量的影响 | 第54-57页 |
| 第四章 结论与展望 | 第57-59页 |
| ·结论 | 第57页 |
| ·展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 附录1 英文缩略词(ABBREVIATION) | 第62-63页 |
| 附录2 菌株JLJ的16S rDNA序列 | 第63-64页 |
| 附录3 质粒pEASY-T1-Pvgb-VHb的PCR测序鉴定 | 第64-65页 |
| 附录4 质粒pET32a~((+))-VHb的PCR测序鉴定 | 第65-66页 |
| 附录5 转化子的PCR验证 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
