人赖氨酸特异性去甲基化酶LSD1小分子抑制剂的发现
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| ·表观遗传学 | 第11-13页 |
| ·组蛋白的甲基化修饰 | 第13-14页 |
| ·LSD1的结构简介及生物学功能 | 第14-27页 |
| ·LSD1的分子结构 | 第14-16页 |
| ·LSD1非组蛋白底物 | 第16-17页 |
| ·LSD1的组织分布 | 第17-18页 |
| ·LSD1的生物学功能 | 第18-23页 |
| ·LSDl现有抑制剂 | 第23-27页 |
| 第二章 LSD1活性蛋白的表达及纯化 | 第27-43页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·试验方法 | 第29-35页 |
| ·常规分子生物学方法 | 第29页 |
| ·引物的设计以及合成 | 第29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第30页 |
| ·连接与转化 | 第30-31页 |
| ·质粒抽提与验证 | 第31页 |
| ·重组蛋白表达条件的摸索 | 第31-32页 |
| ·重组目的蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第33页 |
| ·目的蛋白活性的检测 | 第33-34页 |
| ·最适反应酶浓度 | 第34页 |
| ·最适反应时间 | 第34-35页 |
| ·阳性化合物确认 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 LSD1抑制剂的高通量筛选 | 第43-57页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-50页 |
| ·高通量筛选反应体系的确定 | 第44-45页 |
| ·高通量筛选前的质量控制 | 第45-46页 |
| ·高通量筛选 | 第46-50页 |
| ·结果 | 第50-55页 |
| ·筛选系统的稳定性和可信度 | 第50-51页 |
| ·高通量筛选结果 | 第51-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 LSD1抑制剂细胞水平评价和选择性评价 | 第57-68页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-60页 |
| ·细胞培养 | 第58页 |
| ·MTS法检测细胞活性 | 第58-59页 |
| ·MAOA检测原理 | 第59页 |
| ·MAOA最适反应浓度的确定 | 第59-60页 |
| ·MAOA最适反应时间 | 第60页 |
| ·MAOA最适底物浓度 | 第60页 |
| ·阳性化合物确认 | 第60页 |
| ·候选化合物对MAOA活性的影响 | 第60页 |
| ·实验结果 | 第60-66页 |
| ·实验讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 硕士期间取得的科研成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
