| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-19页 |
| 第一章 nleB1、nleB2转录水平的评价分析 | 第19-23页 |
| 1 实验材料 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-21页 |
| ·实时定量PCR引物设计 | 第19页 |
| ·总RNA的提取 | 第19-20页 |
| ·cDNA链的合成 | 第20页 |
| ·实时定量PCR | 第20-21页 |
| 3 实验结果 | 第21-22页 |
| ·RNA提取结果 | 第21页 |
| ·实时定量PCR结果 | 第21-22页 |
| 4 讨论 | 第22-23页 |
| 第二章 nleB1,nleB2基因敲除株的构建 | 第23-37页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| ·主要实验试剂 | 第23页 |
| ·溶剂配制 | 第23页 |
| ·主要的仪器设备 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-31页 |
| ·nleB1,nleB2基因敲除引物的设计 | 第24-25页 |
| ·制备敲除nleB1,nleB2的同源重组片段 | 第25-29页 |
| ·EHECO157：H7/pKD46感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·同源重组片段点击转化EHEC O157:H7/pKD46感受态细胞 | 第30页 |
| ·鉴定EHEC O157：H7△nleB1：：kan、EHEC O157：H7△nleB2：：kan菌株 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-36页 |
| ·基因nleB1上、下游同源臂及Kan片段的制备 | 第31-32页 |
| ·基因nleB1同源重组片段的制备 | 第32页 |
| ·连接T载体后的酶切获得同源重组片段 | 第32-33页 |
| ·nleB1同源重组片段的大量制备 | 第33页 |
| ·鉴定EHEC O157：H7 AnleB1：：Kan菌株 | 第33-34页 |
| ·nleB2上、下游同源臂及Kan片段的制备 | 第34页 |
| ·nleB2同源重组片段的制备 | 第34-35页 |
| ·基因nleB2同源重组片段的大量制备 | 第35页 |
| ·鉴定EHEC O157：H7△nleB2：：Kan菌株 | 第35-36页 |
| 4 小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 肠出血性大肠杆菌O157：H7 AnleB1/nleB2毒力评价 | 第37-44页 |
| 1 实验材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要溶液配制 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-40页 |
| ·肠出血性大肠杆菌O157：H7△nleB1和△nleB2在不同培养基中的生长状态 | 第38页 |
| ·肠出血性大肠 O157：H7 △nleB1和△nleB2对粘附细胞数目的影响 | 第38-39页 |
| ·敲除前后对IL-8表达的影响 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| ·肠出血性大肠杆菌O157：H7△nleB1和△nleB2在不同培养基中的生长状态 | 第40-42页 |
| ·肠出血性大肠杆菌O157：H7 △nleB1和△nleB2对粘附细胞数目的影响 | 第42页 |
| ·肠出血性大肠杆菌O157：H7野生株、△nleB1和△nleB2对IL-8表达的影响 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 nleB1,nleB2对NF-κB信号通路的影响 | 第44-53页 |
| 1 实验材料 | 第44页 |
| ·实验试剂 | 第44页 |
| ·溶液的配制 | 第44页 |
| ·主要的仪器设备 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-50页 |
| ·重组表达载体的构建策略 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增nleB1,nleB2基因 | 第45页 |
| ·pMD19-T-nleB1,pMD19-T-nleB2载体的构建 | 第45-47页 |
| ·pAcGFP-nleB1,pAcGFP-nleB2载体的构建 | 第47-49页 |
| ·nleB1,nleB2对NF-κB信号通路的影响 | 第49-50页 |
| 3 实验结果 | 第50-52页 |
| ·原核表达载体pAcGFP-nleB1,pAeGFP-nleB2的构建和鉴定 | 第50-51页 |
| ·pAcGFP/pAcGFP-nleB1/pAcGFP-nleB2,pNF-KB-luc,pRL-TK转染至293细胞 | 第51页 |
| ·nleB1,nleB2对NF-κB信号通路的影响 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 全文总结 | 第53-54页 |
| 1 本实验主要的研究结果 | 第53页 |
| 2 论文的创新点 | 第53页 |
| 3 下一步计划 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 致谢 | 第57-59页 |
| 发表的学术论文目录 | 第59页 |
