致谢 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-17页 |
·植物应对逆境胁迫的调控模式 | 第10页 |
·植物体内特异钙信号的产生 | 第10-11页 |
·高等植物中钙离子的靶蛋白 | 第11-13页 |
·CDPK 家族 | 第11页 |
·钙调素类超蛋白 | 第11-12页 |
·CBL 家族 | 第12-13页 |
·CBL/CIPK 信号系统 | 第13-16页 |
·CIPK 家族 | 第13页 |
·CBL/CIPK 的特异性互作 | 第13-14页 |
·CBLs 与 CIPKs 的亚细胞定位和特异性表达 | 第14-15页 |
·CBL/CIPK 系统与植物的抗逆性 | 第15-16页 |
·研究目的及意义 | 第16-17页 |
第二章 ZmCIPK8 及 CBLs 序列分析 | 第17-23页 |
·引言 | 第17页 |
·方法 | 第17页 |
·ZmCIPK8 及 CBLs 基因序列的获取 | 第17页 |
·蛋白序列分析方法 | 第17页 |
·蛋白序列比对 | 第17页 |
·进化树分析 | 第17页 |
·蛋白功能位点分析 | 第17页 |
·结果 | 第17-22页 |
·玉米中的 CIPK8 及 CBLs 基因序列 | 第17页 |
·ZmCIPK8 及 10 个 CBL 的蛋白序列分析 | 第17-22页 |
·ZmCIPK8 的蛋白序列分析 | 第17-18页 |
·10 个 CBL 蛋白序列分析 | 第18-22页 |
·结论与讨论 | 第22-23页 |
第三章 酵母双杂交筛选与 ZmCIPK8 互作的 CBLs | 第23-44页 |
·引言 | 第23页 |
·材料 | 第23-26页 |
·玉米材料与载体 | 第23-24页 |
·实验试剂及仪器 | 第24页 |
·常用试剂及缓冲液配置方法 | 第24-25页 |
·培养基 | 第25-26页 |
·方法 | 第26-36页 |
·载体构建 | 第26-33页 |
·ZmCIPK8 及 CBLs 目的基因的克隆 | 第26-30页 |
·PCR 产物的回收 | 第30页 |
·回收 DNA 片段连接 PMD19-T 载体 | 第30页 |
·连接产物转化大肠杆菌 DH5a | 第30-31页 |
·质粒 DNA 的提取 | 第31-32页 |
·质粒鉴定 | 第32-33页 |
·测序比对 | 第33页 |
·诱饵载体及猎物载体的构建 | 第33页 |
·诱饵的自激活验证 | 第33-34页 |
·共转化法进行酵母双杂交筛选 | 第34-36页 |
·酵母感受态的制备 | 第34页 |
·共转化 | 第34-35页 |
·酵母克隆的阳性鉴定 | 第35页 |
·X-gal 染色活性测定 | 第35-36页 |
·实验结果 | 第36-43页 |
·载体构建 | 第36-39页 |
·ZmCIPK8 及 CBLs 基因的克隆 | 第36-37页 |
·ZmCIPK8 及 CBLs 基因 PCR 扩增结果 | 第37-38页 |
·载体构建 | 第38-39页 |
·自激活检测结果 | 第39-40页 |
·酵母双杂交筛选结果 | 第40-41页 |
·酵母质粒的 PCR 检测 | 第41-42页 |
·X-gal 染色活性结果 | 第42-43页 |
·讨论 | 第43-44页 |
第四章 酵母双杂交筛选出的 CBLs 基因的表达分析和亚细胞定位 | 第44-53页 |
·引言 | 第44页 |
·材料 | 第44-45页 |
·玉米材料 | 第44页 |
·洋葱材料 | 第44页 |
·实验试剂及仪器 | 第44页 |
·常用溶液及缓冲液 | 第44页 |
·培养基 | 第44-45页 |
·方法 | 第45-48页 |
·半定量 RT-PCR | 第45-46页 |
·TRIzol 法提取总 RNA | 第45页 |
·RNA 纯化 | 第45页 |
·RNA 反转录成 cDNA | 第45页 |
·RT-PCR | 第45-46页 |
·引物 | 第46页 |
·亚细胞定位 | 第46-48页 |
·CBL1、CBL4、CBL9 三个目的基因的扩增 | 第46-47页 |
·PS1300-CBL1,PS1300-CBL4,PS1300-CBL9 载体构建 | 第47页 |
·质粒转化农杆菌 EH105 | 第47-48页 |
·瞬时表达 | 第48页 |
·结果与分析 | 第48-52页 |
·RT-PCR | 第48-49页 |
·亚细胞定位 | 第49-51页 |
·基因克隆 | 第49-50页 |
·融合表达载体的构建 | 第50-51页 |
·亚细胞定位结果 | 第51-52页 |
·讨论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-60页 |
英文摘要 | 第60-61页 |