| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-23页 |
| ·弓形虫检测方法的研究 | 第12-14页 |
| ·病原学诊断 | 第12页 |
| ·分子生物学诊断 | 第12-13页 |
| ·免疫学诊断 | 第13页 |
| ·免疫学检测方法的应用比较 | 第13-14页 |
| ·规模化猪场的弓形虫病 | 第14-18页 |
| ·血清流行病学 | 第14-16页 |
| ·猪肉及制品中弓形虫的检测 | 第16-17页 |
| ·临床弓形虫病 | 第17-18页 |
| ·弓形虫病的治疗及抗药性 | 第18-21页 |
| ·弓形虫病的治疗 | 第18-19页 |
| ·弓形虫的抗药性 | 第19-21页 |
| ·弓形虫抗药性的发现历史 | 第19页 |
| ·弓形虫抗药性的实验室诊断 | 第19-20页 |
| ·弓形虫抗药性的种类 | 第20-21页 |
| ·猪场弓形虫感染危险因素的评估及预防 | 第21-23页 |
| 2 研究目的意义 | 第23-24页 |
| 3 材料和方法 | 第24-35页 |
| ·试验材料 | 第24页 |
| ·质粒、菌株、虫株 | 第24页 |
| ·主要药品及试剂 | 第24页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第24-26页 |
| ·抗生素类 | 第24页 |
| ·细菌培养基 | 第24页 |
| ·质粒抽提溶液 | 第24-25页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第25页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第25页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·质粒的小量制备 | 第26-27页 |
| ·诱导表达 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第27-28页 |
| ·West-blot实验 | 第28-29页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第29页 |
| ·包涵体的提取、溶解和复性 | 第29页 |
| ·MAG-ELISA方法的建立 | 第29-31页 |
| ·MAG-ELISA操作步骤 | 第29-30页 |
| ·抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定 | 第30页 |
| ·MAG-ELISA最佳封闭液浓度和封闭时间的确定 | 第30页 |
| ·MAG-ELISA血清最佳作用时间的确定 | 第30-31页 |
| ·MAG-ELISA二抗最佳浓度和最适作用时间的确定 | 第31页 |
| ·MAG-ELISA的结果判定 | 第31页 |
| ·MAG-ELISA特异性试验 | 第31页 |
| ·MAG-ELISA重复性试验 | 第31页 |
| ·MAG-ELISA保质期试验 | 第31页 |
| ·弓形虫抗药性的检测 | 第31-33页 |
| ·临床样品基因组的提取 | 第31-32页 |
| ·临床样品弓形虫的检测 | 第32页 |
| ·弓形虫基因组扩增 | 第32页 |
| ·弓形虫DHPS基因的克隆 | 第32页 |
| ·弓形虫DHFR基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·弓形虫Cytb基因的克隆 | 第33页 |
| ·规模化猪场弓形虫病的防控 | 第33-35页 |
| ·规模化猪场血清样品的采集 | 第33-34页 |
| ·实施弓形虫病防控方案猪场的选择 | 第34页 |
| ·规模化猪场弓形虫病防控方案的实施 | 第34页 |
| ·防控效果的评估 | 第34页 |
| ·弓形虫防控对猪群疫苗免疫的影响 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-57页 |
| ·MAG-ELISA方法的建立 | 第35-45页 |
| ·多表位抗原基因的合成 | 第35-36页 |
| ·pGEX-KG-MIC3重组表达质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·pGEX-KG-MAG的原核表达 | 第37页 |
| ·pGEX-KG-MAG免疫活性的验证 | 第37-38页 |
| ·最佳诱导表达条件的确定及大量提取 | 第38-39页 |
| ·MAG-ELISA抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第39-40页 |
| ·封闭浓度及封闭时间的确定 | 第40-41页 |
| ·最适血清工作时间的确定 | 第41页 |
| ·酶标AG最适浓度和最佳作用时间的确定 | 第41-42页 |
| ·底物作用时间的确定 | 第42-43页 |
| ·MAG-ELISA的结果判定 | 第43页 |
| ·特异性试验 | 第43页 |
| ·重复性实验 | 第43-44页 |
| ·保质期实验 | 第44-45页 |
| ·MAG-ELISA和AG-EILSA对临床样品的检测 | 第45页 |
| ·弓形虫抗药性的研究 | 第45-51页 |
| ·弓形虫临床样品的检测 | 第45-46页 |
| ·弓形虫基因组的扩增 | 第46页 |
| ·弓形虫抗药性检测 | 第46-50页 |
| ·磺胺嘧啶抗药性基因的克隆 | 第46-47页 |
| ·乙胺嘧啶抗药性基因的克隆 | 第47-49页 |
| ·阿托伐醌抗药性基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·弓形虫抗药性分析 | 第50-51页 |
| ·规模化猪场弓形虫病的防控 | 第51-57页 |
| ·自然状态下规模化猪场弓形虫流行病学调查 | 第51-52页 |
| ·实施防控方案猪场的选择 | 第52-53页 |
| ·规模化猪场弓形虫病防控方案的实施 | 第53-54页 |
| ·化学药物的选择及使用 | 第53-54页 |
| ·管理方式的改进 | 第54页 |
| ·弓形虫病防控方案实施后的效果 | 第54-56页 |
| ·弓形虫抗体水平的改变 | 第54-56页 |
| ·弓形虫防控对猪群免疫情况的影响 | 第56-57页 |
| 5 讨论 | 第57-60页 |
| ·多表位抗原基因的选择 | 第57-58页 |
| ·SAG1基因及其编码蛋白质 | 第57页 |
| ·GRA1基因及其编码蛋白质 | 第57页 |
| ·ROP2基因及其编码蛋白质 | 第57-58页 |
| ·GRA4基因及其编码蛋白质 | 第58页 |
| ·MIC3基因及其编码蛋白质 | 第58页 |
| ·弓形虫抗药性基因的选择和检测 | 第58页 |
| ·规模化猪场弓形虫病的防控 | 第58-60页 |
| ·规模化猪场的选择 | 第58页 |
| ·高度流行猪场的防控效果 | 第58-59页 |
| ·中度流行猪场的防控效果 | 第59页 |
| ·轻度流行猪场的防控效果 | 第59页 |
| ·猪瘟抗体对弓形虫抗体的影响 | 第59-60页 |
| 6 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
