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细胞PKR-eIF2α抗新城疫病毒作用研究

摘要第1-7页
Abstract第7-8页
目录第8-11页
英文缩略表第11-12页
第一章 概述第12-20页
   ·新城疫病毒简介第12-13页
   ·双链 RNA 激活的蛋白激酶(PKR)第13-20页
     ·PKR 的结构第13-14页
     ·PKR 的细胞定位第14页
     ·PKR 的 eIF2α激酶活性第14-15页
     ·PKR 的抗病毒作用第15-17页
     ·病毒调节 PKR 活性第17-20页
第二章 NDV 感染对细胞 PKR-eIF2α的作用第20-28页
   ·材料第20页
     ·毒株和细胞第20页
     ·抗体与试剂第20页
     ·主要仪器第20页
   ·试验方法第20-22页
     ·Poly(I:C)处理第20页
     ·病毒紫外灭活第20页
     ·病毒感染第20-21页
     ·细胞样品的收集第21页
     ·蛋白免疫印迹(Western blot)第21页
     ·间接免疫荧光(IFA)第21-22页
   ·实验结果第22-26页
     ·NDV 感染能激活 PKR-eIF2α通路第22页
     ·NDV 通过复制产生的 dsRNA 激活 PKR-eIF2α通路第22-24页
     ·NDV 剂量依赖性的激活 PKR-eIF2α第24-26页
   ·讨论第26-28页
第三章 PKR-eIF2α在抗 NDV 感染中的作用第28-41页
   ·材料第28页
     ·病毒和菌株第28页
     ·载体和分子生物学试剂第28页
     ·主要仪器第28页
   ·试验方法第28-31页
     ·PKR 真核表达质粒的构建第28-29页
     ·针对 PKR 及 eIF2α有效 siRNA 的筛选第29-30页
     ·PKR 对 NDV 复制的影响第30-31页
     ·eIF2α对 NDV 复制的影响第31页
   ·结果第31-38页
     ·pkr 基因扩增及真核表达质粒的构建第31-32页
     ·针对 PKR 和 eIF2α的 siRNA 筛选第32页
     ·PKR 过表达对 NDV 复制的影响第32-34页
     ·靶向干扰 PKR 对 NDV 复制的影响第34-36页
     ·靶向干扰 eIF2α对 NDV 复制的影响第36-37页
     ·药物抑制 eIF2α去磷酸化对 NDV 复制的影响第37-38页
   ·讨论第38-41页
第四章 PKR 在 NDV 诱导干扰素中的作用第41-47页
   ·材料第41页
     ·病毒和菌株第41页
     ·载体和分子生物学试剂第41页
     ·主要仪器第41页
   ·方法第41-43页
     ·NDV 病毒感染 HeLa 细胞第41页
     ·siRNA 转染第41-42页
     ·Trizol 法提取细胞 RNA 及反转录第42页
     ·Real-time PCR第42-43页
   ·结果第43-46页
     ·RNA 干扰效果的检测第43页
     ·Real-time PCR 引物的筛选与优化第43-44页
     ·NDV 感染 HeLa 细胞后 IFN 检测第44-45页
     ·NDV 感染 PKR knockdown HeLa 细胞 IFN-β水平第45-46页
   ·讨论第46-47页
第五章 全文小结第47-48页
参考文献第48-54页
致谢第54-55页
作者简历第55页

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