| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-20页 |
| ·新城疫病毒（NDV） | 第14-15页 |
| ·NDV 简介 | 第14页 |
| ·NDV 的形态学特征 | 第14-15页 |
| ·NDV 的基因组结构 | 第15页 |
| ·反向遗传操作技术 | 第15-16页 |
| ·NDV 活载体疫苗简介 | 第16页 |
| ·IBDV 简介 | 第16-18页 |
| ·IBD 简介 | 第16-17页 |
| ·IBDV 的形态及基因组结构 | 第17-18页 |
| ·IBDV 的主要保护性抗原 | 第18页 |
| ·免疫防治 | 第18页 |
| ·内部核糖体进入位点 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料 | 第20-23页 |
| ·病毒株、细胞株和质粒 | 第20页 |
| ·培养基及生化试剂 | 第20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·鸡胚 | 第21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21-23页 |
| 3 方法 | 第23-36页 |
| ·vvIBDV VP2 基因克隆与序列分析 | 第23-25页 |
| ·vvIBDV VP2 基因的 PCR 扩增 | 第23页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第23页 |
| ·vvIBDV VP2 基因克隆的序列测定 | 第23-25页 |
| ·IRES 基因克隆与序列分析 | 第25-26页 |
| ·IRES 基因的 PCR 扩增 | 第25页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第25页 |
| ·IRES 基因克隆的序列测定 | 第25-26页 |
| ·VP2（BamH I）基因克隆与序列分析 | 第26-27页 |
| ·VP2（BamH I）基因的 PCR 扩增 | 第26页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第26页 |
| ·VP2（BamH I）基因克隆的序列测定 | 第26-27页 |
| ·pMD-VP2-IRES-VP2(BamH I)质粒的构建 | 第27-30页 |
| ·pMD-VP2-IRES 质粒的构建 | 第27-29页 |
| ·pMD-VP2-IRES-VP2（BamH I）质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·表达 VP2-IRES-VP2(BamH I)重组病毒基因组全长 cDNA 的构建 | 第30-32页 |
| ·VP2-IRES-VP2(BamH I)基因片段与重组 NDV 病毒基因组转录载体片段的制备 | 第30页 |
| ·VP2-IRES-VP2(BamH I)基因片段与重组 NDV 病毒基因组转录载体片段连接 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·表达 vvIBDV VP2 基因重组病毒基因组全长 cDNA 的构建 | 第32-33页 |
| ·rClone30-VP2 片段的制备 | 第32页 |
| ·rClone30-VP2 片段连接 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| ·重组 NDV 的拯救及鉴定 | 第33-36页 |
| ·重组 NDV 的拯救 | 第33-34页 |
| ·重组 NDV 的 RT-PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·拯救后的重组 NDV TCID50测定 | 第34页 |
| ·重组 NDV 的细胞增殖稳定性 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光检测（IFA）重组病毒 VP2 基因的表达 | 第34页 |
| ·重组病毒 VP2 基因的 mRNA 水平的检测 | 第34-36页 |
| 4 实验结果 | 第36-51页 |
| ·vvIBDV VP2 基因克隆 | 第36-37页 |
| ·vvIBDV VP2 基因的 PCR 扩增 | 第36页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第36-37页 |
| ·VP2 基因的序列测定 | 第37页 |
| ·IRES 基因克隆 | 第37-39页 |
| ·IRES 基因的 PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第38页 |
| ·IRES 基因的序列测定 | 第38-39页 |
| ·VP2(BamH I)基因克隆 | 第39-40页 |
| ·VP2(BamH I)基因的 PCR 扩增 | 第39页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第39-40页 |
| ·VP2(BamH I)基因的序列测定 | 第40页 |
| ·pMD-VP2-IRES 质粒的构建和阳性重组质粒的鉴定 | 第40-42页 |
| ·IRES 基因片段和 pMD-VP2 载体片段的制备 | 第40-41页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| ·pMD-VP2-IRES-VP2 重组质粒的构建和阳性重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·VP2（BamH I）基因片段和 pMD-VP2-IRES 载体片段的制备 | 第42页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组 NDV rClone30-VP2-IRES-VP2 基因组转录载体的构建和阳性重组质粒的鉴定 | 第43-45页 |
| ·VP2-IRES-VP2 基因片段和 rClone30 载体片段的制备 | 第43-44页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组 NDV rClone30-VP2 基因组载体的构建和阳性重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·rClone30-VP2 载体片段的制备 | 第45页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组 NDV 的拯救及鉴定 | 第46-48页 |
| ·重组 NDV 的拯救 | 第46-47页 |
| ·重组 NDV RT-PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组 NDV 细胞增殖稳定性 | 第48页 |
| ·IFA 重组病毒表达鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组病毒尿囊液的 VP2 基因 mRNA 水平检测 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| ·vvIBDV VP2 基因的选择 | 第51页 |
| ·内部核糖体进入位点的选择 | 第51-52页 |
| ·外源基因的插入位置的选择 | 第52页 |
| ·重组 NDV 的构建及拯救 | 第52页 |
| ·重组病毒的增殖能力 | 第52-53页 |
| ·重组病毒 VP2 基因表达量的比较 | 第53-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 附录 A | 第61-62页 |
| 附录 B | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
