| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-30页 |
| ·降钙素原简介 | 第13-16页 |
| ·降钙素原来源 | 第13页 |
| ·降钙素原生物学功能 | 第13-14页 |
| ·降钙素原检测 | 第14-16页 |
| ·抗体技术 | 第16-25页 |
| ·抗体制备 | 第16-19页 |
| ·抗体的发展 | 第19-20页 |
| ·抗体的应用 | 第20-25页 |
| ·快速诊断研究 | 第25-27页 |
| ·快速诊断简介 | 第25-26页 |
| ·快速诊断研究现状 | 第26页 |
| ·荧光胶乳免疫层析在快速检测中的应用 | 第26-27页 |
| ·本论文研究目的、主要内容及意义 | 第27-30页 |
| ·研究背景及意义 | 第27-28页 |
| ·研究内容 | 第28-29页 |
| ·技术路线 | 第29-30页 |
| 第二章 降钙素原的原核表达 | 第30-50页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料与仪器 | 第30-34页 |
| ·菌种，质粒及引物 | 第30-31页 |
| ·仪器设备 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·常用溶液及培养基的配制 | 第32-34页 |
| ·实验方法 | 第34-45页 |
| ·PCT 目的基因获取 | 第34-37页 |
| ·pET28 质粒准备 | 第37页 |
| ·PCR 扩增产物与 pET28 载体的双酶切与连接 | 第37-38页 |
| ·E.coli DH5α和 E.coli BL21（DE3）感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·pET28-PCT 重组质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·菌落 PCR 鉴定 | 第39-40页 |
| ·双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·测序鉴定 | 第40页 |
| ·转化及鉴定 | 第40页 |
| ·小量表达及表达条件优化 | 第40-42页 |
| ·大量表达及亲和层析纯化 | 第42-43页 |
| ·纯化蛋白脱盐 | 第43页 |
| ·Western Blot 鉴定 | 第43-44页 |
| ·PCT 蛋白活性鉴定 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-49页 |
| ·PCT 目的基因扩增结果 | 第45页 |
| ·菌落 PCR 鉴定图 | 第45-46页 |
| ·重组质粒 pET28-PCT 双酶切鉴定结果 | 第46页 |
| ·PCT 小量诱导表达 | 第46-47页 |
| ·亲和层析纯化结果 | 第47-48页 |
| ·Western Blotting 鉴定结果 | 第48页 |
| ·间接 ELISA 鉴定 PCT 蛋白活性结果 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 降钙素原特异性单克隆抗体的制备，纯化及鉴定 | 第50-71页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50-54页 |
| ·实验动物与细胞株 | 第50页 |
| ·主要仪器设备、耗材 | 第50-51页 |
| ·主要试剂 | 第51-52页 |
| ·培养基与常用溶液 | 第52-54页 |
| ·实验方法 | 第54-61页 |
| ·降钙素原单克隆抗体的制备及纯化 | 第54-58页 |
| ·单克隆抗体的分析鉴定 | 第58-61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-70页 |
| ·小鼠血清的效价分析 | 第61-62页 |
| ·细胞融合及阳性克隆筛选 | 第62-63页 |
| ·五株单克隆抗体亚类的鉴定 | 第63页 |
| ·五株杂交瘤细胞的腹水及纯化后抗体效价检测 | 第63-64页 |
| ·五株单克隆抗体纯化后抗体含量、分子量及纯度 | 第64-65页 |
| ·三株单克隆抗体亲和力的检测 | 第65-68页 |
| ·五株单克隆抗体识别降钙素原的特异性 | 第68页 |
| ·五株杂交瘤细胞株的稳定性及相应抗体的稳定性 | 第68-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 ELISA 平台双抗体夹心法检测 PCT 方法的建立及应用 | 第71-90页 |
| ·前言 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71-73页 |
| ·检测样品 | 第71页 |
| ·主要仪器设备 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71-72页 |
| ·常用溶液 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·单克隆抗体 HRP 标记 | 第73页 |
| ·ELISA 测定标记的活性(直接法) | 第73页 |
| ·抗体在 ELISA 平台的配对（一步法） | 第73-74页 |
| ·配对抗体 Elisa 平台灵敏度及对 CT 和 CGRP 的交叉反应检测 | 第74页 |
| ·最佳抗体对工作条件的优化 | 第74-75页 |
| ·F6-G2，E5-G2 抗体对临床检测应用(双抗体夹心法) | 第75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-89页 |
| ·抗体标记结果 | 第75-76页 |
| ·HRP 标记工作浓度确定 | 第76页 |
| ·抗体在 ELISA 平台的配对 | 第76-77页 |
| ·双抗夹心 ELISA 检测抗体灵敏度及交叉实验结果 | 第77-78页 |
| ·F6-G2、E5-G2 抗体对工作条件优化 | 第78-80页 |
| ·F6-G2，E5-G2 抗体对临床检测应用 | 第80-89页 |
| ·本章小结 | 第89-90页 |
| 第五章 荧光免疫层析检测 PCT 方法的建立及应用 | 第90-104页 |
| ·前言 | 第90页 |
| ·实验材料 | 第90-92页 |
| ·检测样品 | 第90页 |
| ·主要仪器设备 | 第90-91页 |
| ·主要试剂材料 | 第91页 |
| ·主要溶液 | 第91-92页 |
| ·实验方法 | 第92-96页 |
| ·喷膜 | 第92页 |
| ·荧光胶乳标记 | 第92-94页 |
| ·荧光胶乳标记后抗体活性检测 | 第94页 |
| ·免疫层析平台抗体配对 | 第94-95页 |
| ·配对抗体工作条件优化 | 第95页 |
| ·抗体对 F6-C2 临床检测应用 | 第95-96页 |
| ·结果与讨论 | 第96-103页 |
| ·抗体荧光胶乳标记后活性 | 第96-98页 |
| ·免疫层析平台抗体配对结果 | 第98页 |
| ·免疫层析平台 F6-C2 工作条件优化 | 第98-99页 |
| ·F6-C2 免疫层析平台临床检测应用结果 | 第99-103页 |
| ·本章小结 | 第103-104页 |
| 结论和展望 | 第104-106页 |
| 一、结论 | 第104页 |
| 二、创新点 | 第104-105页 |
| 三、展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-111页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 附件 | 第113页 |
