| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-23页 |
| ·引言 | 第7页 |
| ·乳腺癌与 HER2 研究概述 | 第7-16页 |
| ·人乳腺癌的诊断和治疗 | 第7-9页 |
| ·HER2 分子作用机制 | 第9-13页 |
| ·分子靶向治疗与抗 HER2 抗体开发 | 第13-16页 |
| ·抗体技术及 VHH 纳米抗体概述 | 第16-22页 |
| ·抗体技术发展概况 | 第16页 |
| ·基因工程抗体 | 第16-19页 |
| ·VHH 纳米抗体 | 第19-22页 |
| ·本文主要研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-57页 |
| ·实验材料 | 第23-32页 |
| ·细胞株 | 第23页 |
| ·菌株及载体 | 第23-24页 |
| ·VHH 纳米抗体噬菌体文库及辅助噬菌体 | 第24页 |
| ·工具酶及试剂 | 第24-27页 |
| ·培养基与溶液 | 第27-30页 |
| ·实验仪器 | 第30-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-57页 |
| ·提取并扩增 HER2-ECD cDNA 片段 | 第32-36页 |
| ·pGEX-4T-1-HER2-ECD 重组质粒的构建 | 第36-40页 |
| ·pGEX-4T-1-HER2-II 及 pGEX-4T-1-HER2-IV 重组表达载体构建 | 第40-45页 |
| ·GST- HER2-II 及 GST-HER2-II 在 E. coli BL21 中诱导表达 | 第45-46页 |
| ·表示产物的 SDS-PAGE 检测 | 第46-48页 |
| ·蛋白诱导表达条件的优化 | 第48-49页 |
| ·GST-HER2-II 及 GST-HER2-IV 的亲和纯化 | 第49-50页 |
| ·亲和纯化蛋白的精制及浓度测定 | 第50-52页 |
| ·VHH 纳米抗体噬菌体文库的扩增 | 第52-54页 |
| ·筛选 anti-HER2-II 及 anti-HER2-IV 的 VHH 纳米抗体 | 第54-57页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第57-78页 |
| ·抗原重组表达载体的构建 | 第57-62页 |
| ·重组载体 pGEX-4T-1-HER2-ECD 的构建 | 第57-60页 |
| ·重组载体 pGEX-4T-1- HER2-II 及 pGEX-4T-1- HER2-IV 的构建 | 第60-62页 |
| ·重组抗原蛋白的表达及纯化 | 第62-72页 |
| ·重组质粒 pGEX-4T-1-HER2-II 及 pGEX-4T-1-HER2-IV 在 E.coli BL21中诱导表达 | 第62-64页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第64-68页 |
| ·亲和色谱法纯化 GST-HER2-II 和 GST-HER2-IV 蛋白 | 第68-71页 |
| ·纯化产物精制及浓度测定 | 第71-72页 |
| ·抗原特异性 VHH 抗体噬菌体的筛选 | 第72-76页 |
| ·纳米抗体噬菌体库的扩增 | 第72-74页 |
| ·抗原特异性 VHH 纳米抗体的筛选 | 第74-76页 |
| ·本章小结 | 第76-78页 |
| 第四章 结论与展望 | 第78-80页 |
| ·结论 | 第78页 |
| ·展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
