| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-33页 |
| ·副猪嗜血杆菌病 | 第16-23页 |
| ·病原学 | 第16-19页 |
| ·流行病学 | 第19页 |
| ·副猪嗜血杆菌的致病机理研究 | 第19-21页 |
| ·副猪嗜血杆菌的毒力相关因子研究 | 第21-22页 |
| ·副猪嗜血杆菌病原检测方法的研究进展 | 第22-23页 |
| ·宿主对抗细菌病原的免疫应答 | 第23-27页 |
| ·天然免疫 | 第24页 |
| ·获得性免疫 | 第24-25页 |
| ·巨噬细胞在天然免疫中对抗细菌感染的研究 | 第25-26页 |
| ·细菌病原干扰巨噬细胞发挥免疫学功能的机制 | 第26-27页 |
| ·基因芯片在病原微生物研究中的应用 | 第27-29页 |
| ·恒温扩增方法 | 第29-31页 |
| ·恒温扩增方法简介 | 第29页 |
| ·环介导的恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP) | 第29-31页 |
| ·本研究的意义 | 第31-33页 |
| 第2章 副猪嗜血杆菌血清5型感染猪肺泡巨噬细胞转录组学研究 | 第33-83页 |
| ·研究的目的及意义 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-44页 |
| ·菌株 | 第33页 |
| ·培养基与溶液配方 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·试验分组 | 第35页 |
| ·细菌计数 | 第35页 |
| ·人工感染及样品采集 | 第35页 |
| ·攻毒菌株的再分离 | 第35页 |
| ·肺泡巨噬细胞的分离鉴定 | 第35-36页 |
| ·肺泡巨噬细胞总RNA的提取 | 第36页 |
| ·RNA的纯化 | 第36页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第36-37页 |
| ·cDNA第二链合成 | 第37页 |
| ·双链DNA纯化 | 第37-38页 |
| ·生物素标记cRNA | 第38页 |
| ·cRNA纯化 | 第38-39页 |
| ·cRNA片段化 | 第39页 |
| ·基因芯片杂交及分析 | 第39-40页 |
| ·芯片结果实时荧光定量PCR分析 | 第40-41页 |
| ·差异表达基因的互作分析 | 第41-42页 |
| ·病理切片制作 | 第42页 |
| ·coronin 1a,s100a4和s100a6基因的克隆 | 第42页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43页 |
| ·基因进化分析 | 第43页 |
| ·coronin 1a,s100a4和s100a6基因的组织分布 | 第43-44页 |
| ·猪S100A4和S100A6在HPS感染后免疫组化分析 | 第44页 |
| ·LPS和Poly(I:C)刺激PK-15细胞表达s100a4和s100a6基因 | 第44页 |
| ·感染HPS猪的重要组织中s100a4和s100a6表达水平 | 第44页 |
| ·统计学分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-77页 |
| ·感染前仔猪的检测 | 第44-45页 |
| ·HPS血清5型感染仔猪症状的评估 | 第45-48页 |
| ·样品RNA质量检测 | 第48页 |
| ·芯片杂交结果及差异表达基因聚类分析 | 第48-49页 |
| ·差异表达基因biological process gene ontology分析 | 第49-62页 |
| ·芯片结果qPCR验证 | 第62-63页 |
| ·差异表达基因编码蛋白之间的相互作用 | 第63-66页 |
| ·鉴定出新的副猪嗜血杆菌感染相关基因 | 第66页 |
| ·coronin 1a、s100a4、s100a6基因的克隆 | 第66-68页 |
| ·coronin 1a、s100a4、s100a6基因的多序列比对及进化树分析 | 第68-71页 |
| ·coronin 1a、s100a4、s100a6基因的组织分布 | 第71-72页 |
| ·LPS和Poly(I:C)刺激PK-15细胞表达s100a4和s100a6基因 | 第72-73页 |
| ·感染HPS猪的重要组织中s100a4和s100a6表达水平 | 第73-77页 |
| ·讨论 | 第77-81页 |
| ·猪肺泡巨噬细胞对副猪嗜血杆菌感染的免疫应答 | 第77-80页 |
| ·鉴定到新的副猪嗜血杆菌感染相关基因 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-83页 |
| 第3章 LAMP方法检测副猪嗜血杆菌 | 第83-96页 |
| ·研究的目的及意义 | 第83页 |
| ·材料与方法 | 第83-86页 |
| ·菌株 | 第83页 |
| ·培养基与溶液配方 | 第83页 |
| ·试剂与材料 | 第83-84页 |
| ·病原菌的分离 | 第84页 |
| ·nested PCR检测 | 第84页 |
| ·LAMP反应模板制备 | 第84页 |
| ·LAMP反应引物设计 | 第84-85页 |
| ·LAMP反应条件优化 | 第85页 |
| ·LAMP反应特异性 | 第85页 |
| ·LAMP反应灵敏度 | 第85-86页 |
| ·人工感染样品检测 | 第86页 |
| ·临床样品检测 | 第86页 |
| ·统计学分析 | 第86页 |
| ·结果 | 第86-93页 |
| ·LAMP反应模板制备 | 第86页 |
| ·LAMP反应引物 | 第86-87页 |
| ·LAMP反应条件优化 | 第87-89页 |
| ·LAMP反应特异性 | 第89-91页 |
| ·LAMP反应灵敏度 | 第91-92页 |
| ·人工感染样品检测 | 第92-93页 |
| ·临床样品检测 | 第93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 第4章 结论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-113页 |
| 附表 | 第113-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 博士期间发表的文章 | 第146-147页 |
| 附录 | 第147页 |
