| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 1 研究内容和技术路线 | 第13-16页 |
| ·研究内容 | 第13-15页 |
| ·筛选表达受 DNA 甲基化修饰的 miRNA | 第13页 |
| ·分析 5azadC 对胃癌细胞周期的影响及其机制 | 第13页 |
| ·分析调整细胞内 miRNA 水平后细胞增殖能力的变化 | 第13-14页 |
| ·分析 miRNA 的靶基因 | 第14-15页 |
| ·技术路线 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-31页 |
| ·材料 | 第16-19页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·主要试剂 | 第17-19页 |
| ·胃癌患者组织标本 | 第19页 |
| ·细胞株 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-31页 |
| ·细胞培养 | 第19-21页 |
| ·5azadC 母液的配制 | 第21页 |
| ·miRNA 类似物和抑制剂的合成 | 第21-22页 |
| ·DNMT 抑制剂 5azadC 处理胃癌细胞 | 第22页 |
| ·转染 miRNA 类似物或抑制剂 | 第22页 |
| ·MTT 方法分析 5azadC 对胃癌细胞增殖的影响 | 第22-23页 |
| ·RTCA 技术监测 miRNA 类似物或抑制剂对细胞增殖的影响 | 第23页 |
| ·MTT 方法验证 miRNA 类似物对细胞增殖的影响 | 第23-24页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期的变化 | 第24页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第24-25页 |
| ·RNA 含量测定 | 第25页 |
| ·实时定量 RTPCR 技术检测 miRNA 的水平 | 第25-26页 |
| ·蛋白印迹技术检测蛋白表达水平 | 第26-29页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测系统验证靶基因 | 第29-30页 |
| ·统计方法 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-52页 |
| ·胃癌细胞中 miRNA 表达水平与甲基化情况 | 第31-35页 |
| ·miR195 和 miR378 基因启动子存在 CpG 岛 | 第31-32页 |
| ·DNMT 抑制剂 5azadC 能恢复 miR195 和 miR378 的表达 | 第32页 |
| ·基因启动子无 CpG 岛的 miRNA 的表达不受 5azadC 的影响 | 第32-33页 |
| ·miR195 和 miR378 在胃癌细胞和组织中低表达 | 第33页 |
| ·组织 miRNA 表达水平与胃癌患者临床病理因素的关系 | 第33-35页 |
| ·5azadC 对胃癌细胞生长和细胞周期的影响及其分子机制 | 第35-38页 |
| ·5azadC 对胃癌细胞增殖的影响 | 第35页 |
| ·5azadC 影响胃癌细胞的细胞周期 | 第35-37页 |
| ·5azadC 对周期相关蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
| ·miRNA 类似物和抑制剂对细胞增殖的影响及其分子机制 | 第38-46页 |
| ·miR195 和 miR378 的类似物显著抑制胃癌细胞的生长 | 第38-42页 |
| ·转染的 miRNA 类似物能使细胞中相应 miRNA 水平上升 | 第42页 |
| ·miR195 和 miR378 的抑制剂显著抑制正常胃黏膜细胞的生长 | 第42-44页 |
| ·miR195 和 miR378 类似物影响胃癌细胞的细胞周期 | 第44-46页 |
| ·miR195 和 miR378 的肿瘤相关靶基因分析 | 第46-52页 |
| ·miR195 类似物能抑制 CDK6 的表达 | 第46-47页 |
| ·miR378 类似物能抑制 VEGF 的表达 | 第47-49页 |
| ·靶点验证 | 第49-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 5 全文小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录A 缩略词 | 第60-61页 |
| 附录B 综述 | 第61-74页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 在学研究成果 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
