| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-14页 |
| 1. 研究方案 | 第14-15页 |
| ·技术路线 | 第14-15页 |
| ·研究内容 | 第15页 |
| 2. 材料 | 第15-19页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第16-17页 |
| ·主要试剂配置 | 第17-19页 |
| 3. 实验方法 | 第19-31页 |
| ·第一部分：建立一种简单可靠的基于 MS-HRM 技术的高通量的检测DNA 甲基化分析方法 | 第19-26页 |
| ·重亚硫酸钠处理基因组 DNA | 第19页 |
| ·不同方法纯化 Bis-DNA（重亚硫酸钠处理后的DNA） | 第19-20页 |
| ·对不同方法纯化的 Bis-DNA 进行 400-200 nm 全波长扫描以比较纯化效果和回收率 | 第20页 |
| ·PCR 反应的Buffer 的选择 | 第20页 |
| ·PCR | 第20-22页 |
| ·picogreen 的灵敏度评价 | 第22-23页 |
| ·检测新方法的可行性 | 第23-26页 |
| ·第二部分：胃癌 SEPTIN 9 启动子甲基化的研究及其意义 | 第26-27页 |
| ·收集肿瘤标本 | 第26页 |
| ·提取肿瘤组织基因组 DNA 或石蜡包埋组织基因组 DNA | 第26页 |
| ·重亚硫酸钠处理基因组 DNA，并及时纯化回收 Bis-DNA | 第26页 |
| ·MS-HRM 标准品配置 | 第26页 |
| ·PCR 及 MS-HRM 分析 | 第26页 |
| ·数据分析 | 第26-27页 |
| ·第三部分：RKO 细胞株中 SEPTIN 5 和 SEPTIN 8 启动子甲基化的研究 | 第27-31页 |
| ·采用甲基化芯片技术进行全基因组筛选 | 第27页 |
| ·提取 RKO 细胞株基因组 DNA | 第27页 |
| ·重亚硫酸钠处理基因组 DNA，并及时纯化回收 Bis-DNA | 第27页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第28-29页 |
| ·纯化 PCR 产物 | 第29页 |
| ·制备电转化感受态大肠杆菌 | 第29-30页 |
| ·TA 克隆 | 第30-31页 |
| 4. 实验结果 | 第31-36页 |
| ·第一部分：建立一个经济可行的快速 DNA 甲基化的检测方法 | 第31-33页 |
| ·不同纯化方法的回收效果以及回收率比较 | 第31页 |
| ·不同的 10×PCR Buffer 对 PCR 扩增结果的影响 | 第31-32页 |
| ·不同纯化方法对 PCR 扩增反应的影响 | 第32页 |
| ·Picogreen 的灵敏度评价 | 第32-33页 |
| ·新方法的临床验证 | 第33页 |
| ·第二部分：胃癌 SEPTIN 9 启动子甲基化的研究及其意义 | 第33-34页 |
| ·胃癌组织 SEPTIN 9 启动子甲基化与临床病理参数之间的关系 | 第33-34页 |
| ·第三部分：RKO 细胞株中 SEPTIN 5 和 SEPTIN 8 启动子甲基化的研究 | 第34-36页 |
| ·SEPTIN 5 测序结果分析 | 第34-35页 |
| ·SEPTIN 8 测序结果分析 | 第35-36页 |
| 5. 讨论 | 第36-40页 |
| ·第一部分：建立一个经济可行的快速 DNA 甲基化的检测方法 | 第36-37页 |
| ·不同纯化方法的回收效果以及回收率比较 | 第36页 |
| ·不同的 10×PCR Buffer 对 PCR 扩增结果的影响 | 第36-37页 |
| ·不同纯化方法对 PCR 扩增反应的影响 | 第37页 |
| ·Picogreen 的灵敏度评价 | 第37页 |
| ·新方法可行性评价 | 第37页 |
| ·第二部分：胃癌 SEPTIN 9 启动子甲基化的研究及其意义 | 第37-39页 |
| ·第三部分：RKO 细胞株中 SEPTIN 5 和 SEPTIN 8 启动子甲基化的研究29 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录A：缩略词 | 第44-45页 |
| 附录B：部分质粒测序结果 | 第45-47页 |
| 附录C：综述 | 第47-52页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 在学研究成果 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
