| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第7-14页 |
| 1 绪论 | 第14-39页 |
| ·观赏植物花色的分子设计 | 第14-22页 |
| ·花青素苷生物合成途径 | 第14-15页 |
| ·花卉花色的分子设计 | 第15-21页 |
| ·蓝紫色花的分子设计 | 第15-18页 |
| ·白色-浅粉色花的分子设计 | 第18-19页 |
| ·黄色花的分子设计 | 第19-20页 |
| ·橙红色-红色花的分子设计 | 第20-21页 |
| ·花瓣彩斑的分子设计 | 第21页 |
| ·存在的问题 | 第21-22页 |
| ·基因资源的选择 | 第21页 |
| ·基因抑制机制的选择 | 第21-22页 |
| ·转基因植株花色的稳定性 | 第22页 |
| ·RNAi技术在植物中的应用进展 | 第22-27页 |
| ·植物RNAi现象的发现 | 第22-23页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第23页 |
| ·RNAi在植物中的应用 | 第23-27页 |
| ·通过RNAi技术验证基因功能 | 第23-27页 |
| ·通过RNAi技术改良植物性状 | 第27页 |
| ·多基因导入改良植物性状 | 第27-30页 |
| ·基因枪介导的多基因共转化 | 第28页 |
| ·农杆菌介导的多基因共转化 | 第28-30页 |
| ·多载体混合菌液法 | 第29页 |
| ·单菌株单载体 | 第29-30页 |
| ·单菌株多载体 | 第30页 |
| ·展望 | 第30页 |
| ·菊花花色研究进展 | 第30-36页 |
| ·菊花花色古籍记载 | 第30-31页 |
| ·菊花花色的表型分析和花色分类 | 第31-32页 |
| ·菊花花色表型测定 | 第31-32页 |
| ·菊花花色的分类 | 第32页 |
| ·菊花花瓣的色素成分分析 | 第32-33页 |
| ·菊花花色形成机理研究 | 第33-34页 |
| ·菊花花青素苷合成相关基因的分离 | 第33页 |
| ·菊花类胡萝卜素合成相关基因的分离 | 第33-34页 |
| ·菊花花色转基因育种 | 第34-36页 |
| ·菊花不定芽再生和遗传转化研究现状 | 第34-36页 |
| ·菊花花色转基因研究现状 | 第36页 |
| ·本项研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| ·研究目的 | 第36-37页 |
| ·研究内容 | 第37页 |
| ·研究意义 | 第37-38页 |
| ·本项研究的技术路线 | 第38-39页 |
| 2 菊花‘日切桃红’花青素苷合成途径中关键结构基因表达分析 | 第39-54页 |
| ·材料与方法 | 第39-43页 |
| ·植物材料 | 第39-41页 |
| ·花色表型分析 | 第41页 |
| ·花青素苷相对含量的紫外吸光度测定 | 第41页 |
| ·花青素苷成分的HPLC分离 | 第41页 |
| ·关键结构基因的RT-PCR分析 | 第41-43页 |
| ·舌状花RNA提取 | 第41页 |
| ·cDNA合成和PCR反应 | 第41-42页 |
| ·引物 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-50页 |
| ·花色表型分析 | 第43-44页 |
| ·花青素苷HPLC分析 | 第44页 |
| ·舌状花花青素苷的相对含量 | 第44-46页 |
| ·不同发育阶段头状花序舌状花花青素苷相对含量 | 第44-45页 |
| ·花序中不同类型舌状小花花青素苷相对含量 | 第45-46页 |
| ·花青素苷合成关键基因在菊花中的表达模式 | 第46-50页 |
| ·白花突变体内源花青素苷合成途径关键基因表达分析 | 第46-47页 |
| ·F3′5′H同源基因在菊花中的表达分析 | 第47-48页 |
| ·不同花序发育时期花青素苷的合成和关键基因的表达分析 | 第48-49页 |
| ·舌状花不同发育时期花青素苷关键基因表达分析 | 第49页 |
| ·不同器官花青素苷合成关键基因表达分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| ·菊花花青素苷合成机理 | 第50-51页 |
| ·参与菊花蓝色花形成的关键基因 | 第51-52页 |
| ·花青素苷的积累和彩色切花菊育种 | 第52页 |
| ·花器官特异启动子 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 3 菊花节间横切薄层(tTCLs)不定芽再生体系的建立 | 第54-61页 |
| ·材料和方法 | 第54-55页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·节间tTCLs不定芽再生 | 第55页 |
| ·不同生长素种类和浓度对不定芽再生的影响 | 第55页 |
| ·不同取材部位和来源对不定芽再生的影响 | 第55页 |
| ·不同琼脂浓度和温度对菊花玻璃化的影响 | 第55页 |
| ·试管苗的生根及移栽 | 第55页 |
| ·数据统计与分析 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-58页 |
| ·不同生长素浓度对菊花不同品种节间tTCLs不定芽分化的影响 | 第55-56页 |
| ·不同来源和不同取材部位对节间tTCLs不定芽再生的影响 | 第56-57页 |
| ·培养基不同琼脂浓度对不定芽分化和玻璃化的影响 | 第57页 |
| ·不同培养温度对不定芽玻璃化的影响 | 第57-58页 |
| ·生根以及炼苗移栽 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| ·TCLs在器官发生和形态建成中的研究价值 | 第58页 |
| ·菊花节间tTCLs在菊花基因工程中的应用前景 | 第58-59页 |
| ·菊花节间tTCLs培养存在的问题和改进方法 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 4 菊花品种‘日切桃红’横切薄层(tTCLs)不定芽再生和高效遗传转化体系的建立 | 第61-70页 |
| ·材料与方法 | 第61-62页 |
| ·植物材料和农杆菌菌株 | 第61页 |
| ·不定芽诱导 | 第61页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第61-62页 |
| ·工程菌液制备 | 第61页 |
| ·农杆菌转化菊花 | 第61-62页 |
| ·分化筛选培养基 | 第62页 |
| ·统计分析 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-68页 |
| ·不定芽再生 | 第62-64页 |
| ·不定芽畸形苗发生率 | 第64-65页 |
| ·抗性愈伤组织诱导率 | 第65-67页 |
| ·不同分化筛选培养基对抗性愈伤组织诱导的影响 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·不同外植体在不定芽再生和遗传转化能力上的差异 | 第68-69页 |
| ·转化前后外植体不定芽分化模式发生改变 | 第69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 5 异源表达瓜叶菊SCFH对菊花花色的影响 | 第70-81页 |
| ·材料与方法 | 第70-72页 |
| ·植物材料 | 第70页 |
| ·质粒和农杆菌菌株 | 第70页 |
| ·不同外植体不定芽分化的卡那霉素临界选择压的确立 | 第70页 |
| ·不定芽生根临界选择压的确定 | 第70页 |
| ·农杆菌转化菊花 | 第70页 |
| ·转化苗的基因组PCR扩增 | 第70-71页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第70-71页 |
| ·基因组PCR扩增 | 第71页 |
| ·转化苗的RT-PCR分析 | 第71页 |
| ·转化苗的花色表型测定 | 第71页 |
| ·转化苗舌状花花青素苷HPLC分析 | 第71-72页 |
| ·结果与分析 | 第72-78页 |
| ·不同Kan浓度对‘DF-3’不同外植体不定芽分化的抑制作用 | 第72页 |
| ·不同浓度的Kan对不定芽生根的抑制作用 | 第72-74页 |
| ·‘DF-3’横切薄层转化SCFH和转化苗的获得 | 第74页 |
| ·抗性苗的PCR检测 | 第74-75页 |
| ·转化苗SCFH和内源F3 H基因的表达分析 | 第75-76页 |
| ·‘DF-3’SCFH转化苗的花色表型观测 | 第76-77页 |
| ·转化苗色素的HPLC分离 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| ·tTCLs农杆菌介导转化方法的改进 | 第78页 |
| ·F3′5′H同源基因在菊花中异源表达 | 第78-79页 |
| ·外源F3′5′H基因与受体植物花色 | 第79-80页 |
| ·菊科植物F3′H和F3′5′H | 第80页 |
| ·DFR的底物特异性 | 第80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 6 菊花DFR同源基因的分离及其对菊花花色影响的研究 | 第81-103页 |
| ·材料与方法 | 第81-85页 |
| ·植物材料 | 第81页 |
| ·菌株、质粒及主要试材 | 第81页 |
| ·PCR引物 | 第81页 |
| ·RNA的提取 | 第81-82页 |
| ·RACE | 第82页 |
| ·PCR产物凝胶回收 | 第82页 |
| ·连接 | 第82页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第82-83页 |
| ·转化及阳性克隆筛选 | 第83页 |
| ·碱裂法小量提取质粒DNA及酶切鉴定 | 第83-84页 |
| ·CmDFR植物过表达载体和RNA干扰(RNAi)载体的构建 | 第84页 |
| ·CmDFR pBI121过表达载体构建 | 第84-85页 |
| ·农杆菌介导的转基因 | 第85页 |
| ·抗性苗的分子检测 | 第85页 |
| ·转化苗的RT-PCR分析 | 第85页 |
| ·转化苗的花色表型观测 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-99页 |
| ·菊花DFR基因cDNA末端序列扩增 | 第85-87页 |
| ·菊花DFR同源基因cDNA全长序列的分离 | 第87-88页 |
| ·菊花CmDFR的生物信息学分析 | 第88-92页 |
| ·同源性分析 | 第88-90页 |
| ·跨膜结构域分析 | 第90页 |
| ·信号肽分析 | 第90页 |
| ·系统进化树分析 | 第90-91页 |
| ·CmDFR表达模式研究 | 第91-92页 |
| ·CmDFR功能鉴定 | 第92-99页 |
| ·CmDFR过表达载体转化菊花 | 第92-95页 |
| ·CmDFR dsRNAi转化菊花 | 第95-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| ·菊花CmDFR与花青素苷合成 | 第99-100页 |
| ·DFR的基因拷贝数及其表达 | 第100页 |
| ·菊花DFR的底物特异性和蓝色花育种 | 第100-101页 |
| ·花青素苷合成关键酶的互作 | 第101-102页 |
| ·小结 | 第102-103页 |
| 7 SCFH和dsCmF3′Hi共转化菊花的研究 | 第103-113页 |
| ·材料与方法 | 第103-105页 |
| ·植物材料 | 第103页 |
| ·质粒与菌株 | 第103页 |
| ·引物 | 第103-104页 |
| ·方法 | 第104-105页 |
| ·CmF3′H RNA干扰载体构建 | 第104页 |
| ·pBSFH和pBF3′Hi共转化 | 第104页 |
| ·双基因苗分子检测 | 第104页 |
| ·转化苗基因表达分析 | 第104-105页 |
| ·结果与分析 | 第105-111页 |
| ·pBF3′Hi植物表达载体构建 | 第105-106页 |
| ·共转化抗性苗的获得和PCR检测 | 第106-107页 |
| ·PBSFH和pBF3'Hi转化苗花色表型分析 | 第107-110页 |
| ·pBF3'Hi转化苗的F3′H基因表达分析 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-112页 |
| ·多基因导入改良花色 | 第111页 |
| ·多基因导入方法 | 第111页 |
| ·菊花转化率 | 第111-112页 |
| ·F3′H和F3′5H对菊花蓝色花形成的影响 | 第112页 |
| ·小结 | 第112-113页 |
| 8 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-127页 |
| 个人简介 | 第127-128页 |
| 获得成果目录清单 | 第128-129页 |
| 导师简介 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
