| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 缩略表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-24页 |
| 1. 苏云金芽胞杆菌及其在控制农业害虫上的应用 | 第12-13页 |
| 2. 杀虫晶体蛋白 | 第13-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因 | 第13-14页 |
| ·杀虫晶体蛋白结构及其作用机制 | 第14-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白的结构 | 第14页 |
| ·杀虫晶体蛋白的作用机制 | 第14-16页 |
| 3. Cry1Ac结构域Ⅲ β19-β20 loop突变位点的确定 | 第16-17页 |
| 4. 定点突变技术及其应用 | 第17-19页 |
| 5. 定点突变技术改造杀虫晶体蛋白研究进展 | 第19-22页 |
| 6. 立题依据和意义 | 第22-24页 |
| 材料和方法 | 第24-36页 |
| 1. 材料 | 第24-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·培养基和抗生素 | 第24-25页 |
| ·酶与生化试剂 | 第25页 |
| ·PCR引物及测序 | 第25-26页 |
| ·常用溶液和缓冲液 | 第26-27页 |
| ·生测饲料和靶标昆虫 | 第27-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| 2. 方法 | 第28-36页 |
| ·丙氨酸扫描突变子的构建 | 第28-30页 |
| ·pUAc19质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·PCR介导靶位点的突变 | 第29页 |
| ·扩增产物的消化 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌Top10感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·扩增产物的转化和测序 | 第30页 |
| ·表达载体pHTAc35的构建 | 第30-31页 |
| ·cry1Ac突变基因回收 | 第30-31页 |
| ·突变基因连接与转化 | 第31页 |
| ·阳性转化子的快速裂解初筛 | 第31页 |
| ·阳性转化子的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·cry1Ac基因在无晶体突变株cry-B中的表达 | 第31-33页 |
| ·cry-B感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·电转化 | 第32页 |
| ·菌落PCR检测 | 第32-33页 |
| ·发酵培养 | 第33页 |
| ·晶体蛋白的镜检和SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| ·晶体蛋白显微镜检 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第33页 |
| ·突变后蛋白的功能分析 | 第33-36页 |
| ·杀虫活性的测定 | 第33-34页 |
| ·致死率的测定 | 第33-34页 |
| ·半致死浓度(LC_(50))的测定 | 第34页 |
| ·原子力显微镜扫描晶体蛋白 | 第34-35页 |
| ·液体双相法提取纯化突变子晶体 | 第34页 |
| ·原子力显微镜观察 | 第34-35页 |
| ·蛋白酶敏感性试验 | 第35页 |
| ·Deep View/Swiss-Pdb Viewer软件分析 | 第35-36页 |
| 结果与分析 | 第36-57页 |
| 1. cry1Ac基因的丙氨酸扫描突变 | 第36-40页 |
| ·定点突变PCR扩增 | 第36-40页 |
| 2. 突变子表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·阳性转化子的快速裂解初筛 | 第40-41页 |
| 3. 突变质粒电转化cry-B后菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 4. 晶体蛋白的镜检和SDS—PAGE分析 | 第42-45页 |
| ·晶体蛋白显微镜检 | 第42-44页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| 5. 突变后蛋白的功能分析 | 第45-57页 |
| ·致死率的测定 | 第45-48页 |
| ·对棉铃虫LC_(50)的测定 | 第48页 |
| ·原子力显微镜扫描晶体蛋白 | 第48-49页 |
| ·蛋白酶敏感性试验 | 第49-50页 |
| ·Deep View/Swiss-Pdb Viewer软件分析 | 第50-57页 |
| ·突变前后氨基酸残基的变化 | 第50-52页 |
| ·突变效果分析 | 第52-57页 |
| 讨论 | 第57-60页 |
| 1. 突变前后毒素结构和功能的变化 | 第57-58页 |
| 2. 突变技术路线及相关技术问题 | 第58-60页 |
| 结语 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
