重组毕赤酵母表达水蛭素的发酵工艺研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 1 综述 | 第7-21页 |
| ·水蛭素 | 第7-13页 |
| ·水蛭素的发展史 | 第7页 |
| ·水蛭素的结构和性质 | 第7-9页 |
| ·水蛭素的临床应用 | 第9-10页 |
| ·特殊情况下重组水蛭素的应用 | 第10-11页 |
| ·水蛭素的重组表达概述 | 第11-13页 |
| ·水蛭素的生产 | 第13页 |
| ·毕赤酵母的表达系统介绍 | 第13-21页 |
| ·毕赤酵母表达菌株 | 第14-15页 |
| ·表达载体 | 第15-17页 |
| ·转化方法 | 第17-18页 |
| ·启动子 | 第18页 |
| ·信号肽序列 | 第18-19页 |
| ·密码子 | 第19页 |
| ·外源蛋白翻译后的修饰 | 第19-21页 |
| 2 立题意义和研究任务 | 第21-24页 |
| ·立题意义 | 第21-22页 |
| ·本文研究的目的 | 第22页 |
| ·本研究的主要内容 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 3 实验材料与方法 | 第24-28页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·培养方法 | 第25-26页 |
| ·菌种保藏 | 第25页 |
| ·种子活化方法 | 第25页 |
| ·摇瓶培养方法 | 第25页 |
| ·摇瓶诱导培养方法 | 第25-26页 |
| ·30 升发酵罐发酵 | 第26页 |
| ·参数检测与分析方法 | 第26-28页 |
| ·细胞密度测定 | 第26-27页 |
| ·菌体湿重的测定 | 第27页 |
| ·重组水蛭素活性测定 | 第27页 |
| ·甲醇浓度的测定 | 第27页 |
| ·摇瓶培养基pH 的调整 | 第27-28页 |
| 4 水蛭素基因工程菌摇瓶培养和表达的条件优化 | 第28-41页 |
| ·基因重组工程菌培养的工艺研究 | 第28-35页 |
| ·不同摇瓶培养基对工程菌生长的影响 | 第28-29页 |
| ·不同接种量对工程菌生长的影响 | 第29-30页 |
| ·不同温度对工程菌生长的影响 | 第30-31页 |
| ·不同pH 对工程菌生长的影响 | 第31-32页 |
| ·不同溶解氧对工程菌生长的影响 | 第32-33页 |
| ·正交实验确定工程菌摇瓶生长条件 | 第33-34页 |
| ·摇瓶最佳培养时间的确定 | 第34-35页 |
| ·诱导表达的工艺研究 | 第35-40页 |
| ·甲醇诱导浓度对水蛭素表达的影响 | 第35-36页 |
| ·诱导温度对水蛭素表达的影响 | 第36页 |
| ·诱导pH 对水蛭素表达的影响 | 第36-37页 |
| ·溶解氧对水蛭素表达的影响 | 第37-38页 |
| ·不同诱导时机对水蛭素表达的影响 | 第38-39页 |
| ·正交实验优化水蛭素的摇瓶表达条件 | 第39-40页 |
| ·诱导时间对水蛭素表达的影响 | 第40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 5 30 升发酵罐的工艺研究 | 第41-52页 |
| ·溶氧对工程菌生长和表达的影响 | 第42-44页 |
| ·诱导温度对工程菌生长和表达的影响 | 第44-46页 |
| ·改变诱导阶段的PH 对工程菌生长和表达的影响 | 第46-47页 |
| ·外加营养物对工程菌表达水蛭素的影响 | 第47-49页 |
| ·不同细胞密度诱导对工程菌生长和表达的影响 | 第49-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 6 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
