里氏木霉纤维素酶基因的克隆及其在毕赤酵母中表达的研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| ·研究目的及意义 | 第12页 |
| ·国内外研究进展 | 第12-22页 |
| ·纤维素酶的研究进展 | 第12-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第16-22页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-32页 |
| ·试验材料 | 第23-25页 |
| ·菌种及载体 | 第23页 |
| ·试剂及酶类 | 第23页 |
| ·常用试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·主要试验仪器 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-32页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第25-26页 |
| ·里氏木霉RNA的提取 | 第26页 |
| ·RNA的反转录 | 第26-27页 |
| ·里氏木霉DNA的提取 | 第27页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第27-30页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第30页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第30-31页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第31页 |
| ·诱导蛋白质的检测 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-50页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第32-34页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第32页 |
| ·里氏木霉纤维素酶诱导时间的确定 | 第32-34页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第34-45页 |
| ·里氏木霉RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·CBHⅡ基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·EGⅡ基因的克隆 | 第37-39页 |
| ·EGⅣ基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·EGⅤ基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·BGLⅠ基因的克隆 | 第41-45页 |
| ·毕赤酵母表达载体的构建 | 第45-50页 |
| ·表达载体pPIC9多克隆位点的还原 | 第45-46页 |
| ·表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第48-49页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·基因供体的选择 | 第50页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第50页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第50-52页 |
| ·里氏木霉RNA的提取 | 第50页 |
| ·引物的设计 | 第50-51页 |
| ·Taq酶的选择 | 第51页 |
| ·PCR反应条件的确定 | 第51页 |
| ·外显子拼接法克隆BGLⅠ基因 | 第51-52页 |
| ·表达载体的构建 | 第52页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第52页 |
| ·里氏木霉纤维素酶基因在毕赤酵母中表达水平的预测 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| ·里氏木霉的培养 | 第53页 |
| ·纤维素酶基因的克隆 | 第53页 |
| ·表达载体的构建 | 第53页 |
| ·毕赤酵母的表达 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 | 第59-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
