中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-9页 |
第一部分 综述 | 第9-18页 |
第一章 RTNs家族与细胞凋亡的研究进展 | 第9-14页 |
第二章 RTNs家族相互作用蛋白的研究进展 | 第14-18页 |
第二部分 实验研究 | 第18-58页 |
第一章 运用酵母双杂交筛选RTN4-C相互作用的蛋白 | 第18-44页 |
1.材料和试剂 | 第18-23页 |
2.实验方法 | 第23-33页 |
3.实验结果 | 第33-42页 |
·诱饵蛋白载体RTN4-C-pGBKT7在酵母菌AH109中能够正确表达 | 第33-35页 |
·诱饵蛋白在酵母菌中不存在自激活和毒性现象 | 第35-36页 |
·诱饵蛋白大量筛选胎鼠文库的结果 | 第36-38页 |
·阳性克隆的回复验证 | 第38-39页 |
·阳性克隆的测序结果及生物信息学分析 | 第39-41页 |
·相互作用的定量分析 | 第41-42页 |
4.讨论 | 第42-44页 |
第二章 RTN4-C与RTN3相互作用的验证及功能的初步分析 | 第44-58页 |
1.材料和试剂 | 第44页 |
2.实验方法 | 第44-48页 |
·运用免疫共沉淀验证RTN4-C和RTN3在HEK293细胞中相互作用 | 第44-46页 |
·运用免疫荧光分析myc-RTN4-C和HA-RTN3在HEK293细胞中的分布 | 第46页 |
·运用荧光载体分析RTN4-C和RTN3在活细胞内的分布 | 第46-47页 |
·RTN4-C缺失突变体的构建 | 第47-48页 |
3.实验结果 | 第48-56页 |
·免疫共沉淀表明过表达RTN4-C和RTN3能够在HEK293细胞中相互作用 | 第49-50页 |
·免疫荧光显示过表达RTN4-C和RTN3在HEK293细胞中共分布 | 第50页 |
·构建荧光载体融合蛋白显示过表达RTN4-C和RTN3在Hela细胞中共分布 | 第50-51页 |
·RTN4-C通过其疏水区与RTN3相互作用 | 第51-52页 |
·RTN4-C不同缺失突变体在细胞内的分布 | 第52-56页 |
·流式细胞技术分析过表达RTN3能够抑制RTN4-C促进HEK293细胞凋亡的能力 | 第56页 |
4 讨论 | 第56-58页 |
参考文献 | 第58-64页 |
附录 | 第64-65页 |
致谢 | 第65页 |