| 英文缩写符号及中英文对照表 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-27页 |
| ·植物次生代谢物 | 第15-17页 |
| ·倍半萜α-法尼烯生物学效应 | 第17-21页 |
| ·α-法尼烯是植物中主要的挥发香气成分 | 第17页 |
| ·α-法尼烯与虎皮病 | 第17-20页 |
| ·鸭梨虎皮病的研究 | 第17-18页 |
| ·鸭梨虎皮病的防治方法 | 第18-20页 |
| ·α-法尼烯与膜脂抗性 | 第20页 |
| ·α-法尼烯与昆虫诱导 | 第20-21页 |
| ·α-法尼烯生物合成及其分子调控相关酶系的研究 | 第21-25页 |
| ·α-法尼烯的合成途径 | 第21-22页 |
| ·HMG-CoA 还原酶 | 第22-23页 |
| ·法呢基焦磷酸合酶(FPP) | 第23页 |
| ·α-法尼烯合成酶 | 第23-25页 |
| ·乙烯诱导的α-法尼烯合成酶表达特性研究 | 第23-25页 |
| ·α-法尼烯合成酶的酶活研究 | 第25页 |
| ·研究的前景及展望 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-45页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·酶及生化试剂 | 第27页 |
| ·PCR 引物 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-45页 |
| ·CTAB 法提取鸭梨果皮总 RNA | 第28页 |
| ·RNA 电泳检测 | 第28-29页 |
| ·RNA 反转录 | 第29-30页 |
| ·鸭梨α-法尼烯合成酶基因的克隆 | 第30-34页 |
| ·鸭梨α-法尼烯合成酶编码区全长基因的克隆 | 第30-34页 |
| ·PCR 扩增 | 第30页 |
| ·连接反应 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第31-32页 |
| ·碱法小量提取质粒 DNA 及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33页 |
| ·用玻璃奶方法回收纯化 DNA 片段 | 第33-34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·鸭梨α-法尼烯合成酶基因3’RACE 的获得 | 第34页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第34页 |
| ·Northern 杂交 | 第34-38页 |
| ·RNA 提取 | 第34页 |
| ·甲醛变性胶电泳 | 第34-36页 |
| ·转膜 | 第36页 |
| ·预杂交 | 第36-37页 |
| ·探针的制备 | 第37-38页 |
| ·HPLC 检测鸭梨果皮中的α-法尼烯含量 | 第38页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第38-43页 |
| ·RNAi 表达载体 PBI-L-S 的构建 | 第38-43页 |
| ·PCR 引物设计 | 第38-39页 |
| ·PCR 扩增 | 第39页 |
| ·发夹结构的构建 | 第39-43页 |
| ·反义表达载体 PBI-L 的构建 | 第43页 |
| ·根癌农杆菌 EHA105 感受态细胞的制备及转化 | 第43-45页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-59页 |
| ·鸭梨α-法尼烯合成酶基因的克隆 | 第45-47页 |
| ·RNA 的提取及反转录 | 第45页 |
| ·PCR 扩增 | 第45-46页 |
| ·鸭梨 α-法尼烯合成酶基因 3’RACE 的获得 | 第46-47页 |
| ·PFS 基因的序列分析 | 第47-53页 |
| ·PFS 基因核苷酸序列以及推导的氨基酸序列 | 第47-48页 |
| ·α-法尼烯合成酶序列同源性比较分析 | 第48-50页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第50-52页 |
| ·α-法尼烯合成酶系统进化树分析 | 第52页 |
| ·疏水性分析 | 第52-53页 |
| ·PFS 在鸭梨不同部位的表达特性分析 | 第53-55页 |
| ·PFS 在不同鸭梨部位的 Northern 分析 | 第53-54页 |
| ·鸭梨不同部位α-法尼烯含量的 HPLC 检测 | 第54-55页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第55-59页 |
| ·RNAi 表达载体 PBI-L-S 的构建 | 第55-56页 |
| ·正、反片段的扩增、鉴定 | 第55页 |
| ·PBI121 载体的改造及双链 RNA 的克隆载体构建路线 | 第55-56页 |
| ·反义表达载体 PBI-L 的构建 | 第56-59页 |
| 4 讨论 | 第59-67页 |
| ·研究基因功能的方法 | 第59-64页 |
| ·RNAi 的定义及特点 | 第60页 |
| ·RNAi 的分子机制 | 第60-61页 |
| ·RNAi 表达载体的构建设计原则 | 第61-63页 |
| ·利用反义 RNA 技术研究基因功能 | 第63-64页 |
| ·萜类合成的基因修饰 | 第64-65页 |
| ·鸭梨 PFS 基因的特点 | 第65页 |
| ·梨的基因转化研究进展 | 第65-66页 |
| ·进一步研究的设想 | 第66-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第85页 |
