| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-16页 |
| ·小麦赤霉菌基本生物学特征 | 第10-11页 |
| ·小麦赤霉菌病害循环 | 第11页 |
| ·小麦赤霉菌致病力鉴定方法 | 第11页 |
| ·小麦赤霉菌功能基因组学 | 第11-13页 |
| ·有关蛋白激酶A(protein kinase A)的研究 | 第13-14页 |
| ·本研究的目的意义和技术路线 | 第14-16页 |
| 2 小麦赤霉菌FgCPKA基因敲除盒的构建 | 第16-28页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·材料 | 第16页 |
| ·仪器 | 第16页 |
| ·试剂及培养基配方 | 第16-17页 |
| ·试验方法及步骤 | 第17-23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌XL-1Blue的转化 | 第18页 |
| ·pCB1003质粒提取 | 第18-19页 |
| ·野生型PH-1菌株基因组DNA提取 | 第19-20页 |
| ·FgCPKA基因侧翼序列及潮霉素抗性基因hph的PCR扩增 | 第20-23页 |
| ·序列获得及引物设计 | 第20-21页 |
| ·Split marker构建敲除载体 | 第21-23页 |
| ·结果与分析 | 第23-26页 |
| ·TCC蔬菜培养基配方 | 第23-24页 |
| ·提取小麦赤霉菌野生型PH-1基因组DNA及pCB1003质粒DNA | 第24-25页 |
| ·hph基因、FgCPKA基因的上下游序列的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·重叠PCR | 第26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 3 FgCPKA基因的敲除及突变体的获得 | 第28-40页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-34页 |
| ·PEG-CaCl_2介导的原生质体转化 | 第28-29页 |
| ·FgCPKA敲除突变体的筛选和鉴定 | 第29-30页 |
| ·Southern杂交验证 | 第30-34页 |
| ·菌种保存 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-39页 |
| ·通过原生质体转化获得了大量转化子 | 第34-35页 |
| ·PCR检测获得阳性转化子 | 第35-36页 |
| ·CpHA-6的单胞分离及PCR检测 | 第36-37页 |
| ·Southern杂交验证 | 第37-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 4 FgCPKA敲除突变体表型观察及致病力检测 | 第40-47页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·实验方法及步骤 | 第40-42页 |
| ·菌落形态观察 | 第40-41页 |
| ·菌落生长速度的测定 | 第41页 |
| ·分生孢子形态 | 第41页 |
| ·分生孢子产孢率的测定 | 第41页 |
| ·有性杂交实验 | 第41页 |
| ·致病力检测 | 第41-42页 |
| ·在培养基中加入外源cAMP | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·Δfgcpka敲除突变体培养基生长状态 | 第42-43页 |
| ·FgCPKA基因的敲除使分生孢子和子囊孢子的数量都减少 | 第43-44页 |
| ·Δfgcpka敲除突变体对玉米丝、蕃茄致病力明显减弱 | 第44-45页 |
| ·外源cAMP对Δfgcpka敲除突变体的影响 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 5 主要结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
