| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-6页 |
| 前言 | 第6-7页 |
| 第一篇 实验部分 | 第7-45页 |
| 第一章 材料与方法 | 第7-20页 |
| ·材料 | 第7-11页 |
| ·Bac to Bac 细胞表达系统 | 第7页 |
| ·溶液 | 第7-10页 |
| ·培养液 | 第10页 |
| ·PSA 单克隆抗体 | 第10-11页 |
| ·其他 | 第11页 |
| ·方法 | 第11-20页 |
| ·CRL-1740 前列腺癌细胞系的培养 | 第11-12页 |
| ·CRL-1740 前列腺癌细胞系的RNA 抽提与反转录 | 第12页 |
| ·PSA 的基因克隆 | 第12-14页 |
| ·PSA 的巢式 PCR 克隆 | 第12-13页 |
| ·扩增产物的酶切验证 | 第13-14页 |
| ·扩增产物胶回收后进行T 载体转化 | 第14页 |
| ·pFastBac-Fc-GP64 质粒的构建 | 第14-15页 |
| ·GP64 信号肽的构建 | 第14页 |
| ·人源IgG2Fc 的克隆并引入HindIII 和XhoI 酶切位点 | 第14-15页 |
| ·重组PSA 杆状病毒的获得与蛋白表达的验证 | 第15-16页 |
| ·Donor 质粒转化DH10BacTM | 第15页 |
| ·Bacmid-PSA 重组杆粒的抽提 | 第15页 |
| ·重组杆粒的验证 | 第15-16页 |
| ·PSA 重组杆状病毒的获得 | 第16页 |
| ·HighFive 昆虫细胞的培养 | 第16页 |
| ·PSA 重组杆状病毒的包装与获得 | 第16页 |
| ·PSA 蛋白的大量表达 | 第16-17页 |
| ·High Five 细胞的悬浮驯化培养 | 第16-17页 |
| ·High Five 细胞表达重组PSA-Fc | 第17页 |
| ·PSA 蛋白纯化 | 第17页 |
| ·PSA 抗体的纯化和辣根过氧化物酶(HRP)的标记 | 第17-20页 |
| ·硫酸铵盐析法纯化抗体 | 第17页 |
| ·抗体与HRP 酶的交联（戊二醛两步法） | 第17-18页 |
| ·间接酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第18页 |
| ·夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第18-19页 |
| ·Western-Blot | 第19-20页 |
| 第二章 结果 | 第20-39页 |
| ·PSA 基因的克隆 | 第20-24页 |
| ·CRL-1740 前列腺癌细胞株的RNA 抽提 | 第20-21页 |
| ·PSA 基因的巢式 PCR | 第21-24页 |
| ·pFASTBac-Fc-GP64 质粒的构建 | 第24-26页 |
| ·pFastBac-PSA-GP64-Fc 转移质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·重组PSA 杆状病毒的制备与扩增 | 第27-28页 |
| ·重组PSA 杆状病毒的制备 | 第28-29页 |
| ·High Five 昆虫细胞的大规模培养与蛋白的制备 | 第29-33页 |
| ·Biocheck 游离PSA 检测试剂盒检测国际标准品和 rPSA在Biocheck 试剂盒中的相关性 | 第33-34页 |
| ·自制游离PSA 检测试剂盒检测国际标准品和rPSA 在自制游离PSA 检测试剂盒中的相关性 | 第34-36页 |
| ·自制总PSA 检测试剂盒衡量国际标准品，重组纯化PSA作为标准品的线性相关性 | 第36-39页 |
| 第三章 讨论 | 第39-42页 |
| 已申请专利 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-45页 |
| 文献综述 | 第45-58页 |
| 一、蛋白纯化前必要的信息收集 | 第45-46页 |
| 二、蛋白样品的提取 | 第46页 |
| 三、蛋白的分离 | 第46-52页 |
| 四、抗体的工程化纯化 | 第52-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 附录I--已申请专利 | 第58-59页 |
| 附录II—PSA 基因克隆测序比对结果 | 第59-61页 |
| 附录III—GP64 信号肽测序比对结果 | 第61-62页 |
| 附录IV—HumanIgG2Fc 测序比对结果 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
