| 第一部分 综述(Review) | 第1-23页 |
| 肽和蛋白质类药物聚乙二醇化学修饰研究Research development on PEGylation of the peptide and protein drugs | 第5-22页 |
| 一.聚乙二醇修饰的特点及应用 | 第6-12页 |
| 二.多聚乙二醇修饰技术 | 第12-13页 |
| 三.mPEG修饰蛋白质的治疗应用 | 第13-14页 |
| 四.聚乙二醇修饰的优势 | 第14-15页 |
| 五.聚乙二醇修饰方法 | 第15-16页 |
| ·修饰氨基 | 第15-16页 |
| ·修饰羧基 | 第16页 |
| ·修饰巯基 | 第16页 |
| 六.聚乙二醇修饰的鉴定与检测 | 第16-18页 |
| ·聚乙二醇化位点的鉴定 | 第17页 |
| ·聚乙二醇修饰程度的检测 | 第17-18页 |
| 七.聚乙二醇修饰的局限性及生物优化 | 第18-20页 |
| 八.聚乙二醇修饰的应用前景 | 第20页 |
| 九.尿酸酶聚乙二醇化学修饰研究进展 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-23页 |
| 引言(Introduction) | 第23-25页 |
| 摘要 | 第25-26页 |
| ABSTRACT | 第26-28页 |
| 第二部分 实验研究部分(Part2 Experiment) | 第28-57页 |
| 1.实验材料 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.实验方法 | 第29-39页 |
| ·纯品尿酸酶的制备 | 第29-30页 |
| ·层析柱的准备与处理 | 第29-30页 |
| ·样品的预处理 | 第30页 |
| ·纯化 | 第30页 |
| ·尿酸酶纯品的预处理 | 第30页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·不连续体系 | 第31-32页 |
| ·样品处理液 | 第32页 |
| ·染色液和脱色液的配制 | 第32页 |
| ·电泳 | 第32页 |
| ·PAGE | 第32-33页 |
| ·电泳凝胶的配制 | 第32页 |
| ·电极缓冲液的配制 | 第32-33页 |
| ·20×buffer | 第33页 |
| ·2×PAGE样品处理液的配制 | 第33页 |
| ·染色液和脱色液的配制 | 第33页 |
| ·电泳 | 第33页 |
| ·尿酸酶活性的测定及活性单位的定义 | 第33页 |
| ·分子筛(梯度凝胶)电泳 | 第33-35页 |
| ·梯度凝胶溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·4%～30%梯度胶的制备 | 第34页 |
| ·其他溶液的配制 | 第34页 |
| ·灌胶 | 第34页 |
| ·电泳 | 第34-35页 |
| ·尿酸酶PEG化修饰反应条件 | 第35页 |
| ·反应时间和pH对尿酸酶PEG化修饰反应的影响 | 第35页 |
| ·修饰剂浓度对修饰效果的影响 | 第35页 |
| ·尿酸酶浓度对修饰反应的影响 | 第35页 |
| ·Uricase修饰程度的分析 | 第35-37页 |
| ·Uricase-PEG结合物的分离纯化与鉴定 | 第37页 |
| ·Uricase-PEG分离纯化 | 第37页 |
| ·Uricase-PEG的处理 | 第37页 |
| ·Uricase-PEG抗trypsin水解能力 | 第37-38页 |
| ·Uricase-PEG性质的研究 | 第38-39页 |
| ·Uricase-PEG结合物的相对分子质量分析 | 第38页 |
| ·Uricase-PEG和Uricase的最佳pH和pH稳定性比较分析 | 第38页 |
| ·Uricase-PEG和Uricase的最佳温度和热稳定性比较分析 | 第38-39页 |
| ·尿酸酶及PEG化尿酸酶米氏常数(Km)的测定 | 第39页 |
| ·pH对尿酸酶及PEG化尿酸酶米氏常数(Km)的影响 | 第39页 |
| ·温度对尿酸酶及PEG化尿酸酶米氏常数(Km)的影响 | 第39页 |
| 3.结果与讨论(Results&Discussion) | 第39-53页 |
| ·纯品尿酸酶的制备 | 第39-41页 |
| ·尿酸酶PEG化修饰反应条件 | 第41-43页 |
| ·反应时间和pH对修饰反应的影响 | 第41-42页 |
| ·修饰剂浓度对修饰效果的影响 | 第42页 |
| ·尿酸酶浓度对修饰反应的影响 | 第42-43页 |
| ·TNBS法测定尿酸酶修饰度 | 第43页 |
| ·Uricase-PEG结合物的分离纯化与鉴定 | 第43-45页 |
| ·Uricase-PEG抗Trypsin水解能力 | 第45-46页 |
| ·Uricase-PEG结合物的基本特性 | 第46-53页 |
| ·pH对Uricase-PEG反应速度的影响 | 第46-48页 |
| ·温度对Uricase-PEG反应速度的影响 | 第48-49页 |
| ·尿酸酶及PEG化尿酸酶米氏常熟(Km)的测定 | 第49-51页 |
| ·pH对尿酸酶及PEG化尿酸酶米氏常熟(Km)的影响 | 第51-52页 |
| ·温度对尿酸酶及PEG化尿酸酶米氏常数(Km)的影响 | 第52-53页 |
| 4.总结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 在读期间科研成果简介 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
