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基于96孔板法的辣椒cDNA文库筛选及AP2 cDNA的分离研究

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
引言第11-13页
第一章 文献综述第13-20页
 1、UV辐射诱导的防御反应第13-14页
   ·UV辐射对植物的伤害第13-14页
   ·植物对UV响应及植物的防御反应第14页
 2、植物防御反应中的信号转导第14-16页
   ·信号传递途径第14-15页
   ·信号转递过程中的激素类信号分子及其作用的研究进展第15-16页
 3、AP2转录因子的研究进展第16-17页
 4、CDNA文库的筛选方法第17-20页
   ·功能筛选法第18页
   ·表型筛选法第18-19页
   ·应用基因芯片技术从cDNA文库中筛选基因第19页
   ·PCR扩增筛选法第19-20页
第二章 辣椒中若干AP2类转录因子CDNA克隆第20-36页
 1 材料与方法第20-24页
   ·实验材料第20-21页
   ·实验方法第21-24页
     ·辣椒AP2转录因子同源EST搜索、拼接以及AP2特异性引物的设计及合成第21页
     ·cDNA文库和阳性孔噬茵体溶液的扩繁第21页
     ·96孔板法筛选文库第21-22页
     ·阳性孔噬茵体滴度测定第22-23页
     ·目标克隆的检出第23页
     ·目标克隆的转化第23页
     ·目标克隆的内删除、测序和分析第23-24页
 2 结果与分析第24-34页
   ·设计、合成的引物第24页
   ·CaAP21阳性克隆的cDNA文库筛选第24-26页
   ·CaAP22阳性克隆的cDNA文库筛选第26-28页
   ·CAAP23及CAAP24阳性克隆的获得第28-29页
   ·阳性克隆的测序与分析第29-34页
 3.讨论第34-36页
   ·cDNA文库筛选方法第34页
   ·筛选过程中应注意的问题第34页
   ·关于辣椒中AP2转录因子的cDNA阳性克隆第34-36页
第三章 外源信号传递物质处理第36-43页
 对若干辣椒AP2转录因子的转录表达效应第36-43页
  1 材料与方法第36-38页
   ·实验材料第36页
   ·方法第36-38页
     ·材料准备实验第36页
     ·外源信号传递物质对辣椒叶片的诱导处理第36-37页
     ·总RNA的提取第37页
     ·总RNA质量的检测第37-38页
     ·一步法RT-PCR第38页
  2 结果与分析第38-41页
   ·辣椒总RNA提取第38-39页
   ·不同的AP2转录因子在各种外源信号传递物质作用下的转录表达第39-41页
     ·CaAP21转录因子在不同外源信号传递物质作用下的转录表达第39-40页
     ·CaAP22转录因子在不同外源信号传导物质作用下的转录表达第40-41页
  3 讨论第41-43页
   ·关于辣椒总RNA的提取第41页
   ·关于CaAP21、CaAP22上游的可能信号传递途径及它们的可能功能第41-43页
小结第43-50页
附录1 缩略词及英汉对照第50-51页
附录2 主要仪器与主要试剂第51-52页
附录3 所用试剂与缓冲液的配制第52-54页
附录4 本研究中所用的DNA MARKER第54-55页
致谢第55页

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