| 引言 | 第1-14页 |
| 实验材料与方法 | 第14-26页 |
| 一、主要实验试剂 | 第14-15页 |
| 二、主要实验仪器 | 第15页 |
| 三、实验方法 | 第15-26页 |
| 1. 主要溶液 | 第15页 |
| 2. 人CDK4基因的获取 | 第15-17页 |
| ·RNA提取 | 第15-16页 |
| ·逆转录 | 第16页 |
| ·PCR反应 | 第16-17页 |
| 3. PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第17页 |
| 4. PCR产物的回收 | 第17-18页 |
| 5. 人CDK4基因的TA克隆与鉴定 | 第18-20页 |
| ·连接 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·转化 | 第19页 |
| ·阳性克隆的筛选(蓝白筛选) | 第19页 |
| ·质粒小量制备(碱裂解法) | 第19-20页 |
| ·基因序列分析 | 第20页 |
| 6. 人CDK4基因片段的扩增及回收 | 第20-24页 |
| ·原核表达载体pET28a(+)的小量制备 | 第21-22页 |
| ·原核表达载体pET28a(+)的限制性酶切与回收 | 第22页 |
| ·人CDK4基因片段的限制性酶切及回收 | 第22页 |
| ·连接 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第22-23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第23-24页 |
| ·筛选 | 第23页 |
| ·质粒小量制备(碱裂解法)法初步鉴定 | 第23-24页 |
| ·限制性酶切鉴定 | 第24页 |
| 7. 人CDK4基因在大肠杆菌种的表达及鉴定 | 第24-26页 |
| ·用IPTG诱导CDK4蛋白的表达 | 第24页 |
| ·重组表达产物的分离与鉴定 | 第24页 |
| ·SDS-聚丙烯酰凝胶电泳鉴定表达产物 | 第24-25页 |
| ·重组蛋白免疫印迹分析(Western blotting) | 第25-26页 |
| ·转模前的准备 | 第25页 |
| ·蛋白的电转移 | 第25页 |
| ·靶蛋白与抗体结合 | 第25页 |
| ·显色照相 | 第25-26页 |
| 结果 | 第26-31页 |
| 一、人CDK4基因的克隆与鉴定 | 第26-29页 |
| 二、人pET28a(+)-CDK4重组质粒的构建 | 第29页 |
| 三、人CDK4基因表达及鉴定 | 第29-31页 |
| 讨论 | 第31-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 附录 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 中文摘要 | 第45-48页 |
| 英文摘要 | 第48-52页 |
| 致谢 | 第52页 |