| 独创声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-4页 |
| 摘 要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩 略 语 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-35页 |
| 1 文昌鱼的概况 | 第13-28页 |
| ·文昌鱼的发现和研究历史 | 第13-15页 |
| ·形态结构 | 第15页 |
| ·胚胎发育 | 第15-17页 |
| ·文昌鱼分子生物学及其发育和进化 | 第17-21页 |
| ·文昌鱼基因研究概况 | 第19页 |
| ·几个具有重要意义的或研究得相对较多的基因家族 | 第19-21页 |
| ·文昌鱼和脊椎动物的同源性 | 第21-24页 |
| ·文昌鱼在脊椎动物进化历史中的地位：原型(archetype) 、退化(degenerate) 还是侧枝(divergent)? | 第24-28页 |
| 2 尿素酶UREG基因的研究概况 | 第28-32页 |
| ·尿素酶 | 第28-30页 |
| ·细菌中的尿素酶 | 第29页 |
| ·植物中的尿素酶 | 第29-30页 |
| ·尿素酶的同源性 | 第30-31页 |
| ·尿素酶辅助蛋白UreG基因 | 第31-32页 |
| 3 本论文进行的目的和意义 | 第32-33页 |
| 4 本论文所采取的技术路线 | 第33-35页 |
| 第二章 尿素酶辅助蛋白UREG基因的克隆，鉴定，系统进化分析和组织特异性表达的研究 | 第35-82页 |
| 1 前言 | 第35-36页 |
| 2 实验材料和方法 | 第36-68页 |
| ·文昌鱼肠cDNA文库的构建和测序 | 第36-37页 |
| ·文昌鱼肠 | 第36页 |
| ·cDNA文库的构建和测序 | 第36-37页 |
| ·序列比较和系统进化分析 | 第37页 |
| ·RT-PCR分析 | 第37-39页 |
| ·成体文昌鱼不同组织总RNA的制备 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR反应 | 第38-39页 |
| ·RT-PCR产物连接转化 | 第39-46页 |
| ·pGEM?-T Easy载体系统简介 | 第39-41页 |
| ·RT-PCR产物纯化 | 第41-42页 |
| ·pGEM?-T Easy 载体的特殊应用 | 第42页 |
| ·RT-PCR连接转化反应的具体步骤 | 第42-45页 |
| ·筛选阳性克隆和测序 | 第45页 |
| ·缓冲液及溶液配方 | 第45-46页 |
| ·巢式PCR检测 | 第46-49页 |
| ·文昌鱼基因组DNA的提取 | 第46-47页 |
| ·巢式PCR检测 | 第47-49页 |
| ·巢式PCR产物连接转化的具体步骤 | 第49页 |
| ·筛选阳性克隆和测序 | 第49页 |
| ·切片原位分析AmphiUreG基因在成体文昌鱼组织中的表达 | 第49-68页 |
| ·RNA探针的合成 | 第49-56页 |
| ·试验原理 | 第49-52页 |
| ·质粒的提取 | 第52-53页 |
| ·质粒的线性化 | 第53-54页 |
| ·线性化质粒的纯化 | 第54-55页 |
| ·探针的合成 | 第55-56页 |
| ·探针效率的检测 | 第56-57页 |
| ·Dot blot 检测探针质量 | 第57-58页 |
| ·Dot blot 具体步骤 | 第57-58页 |
| ·有关试剂配制如下 | 第58页 |
| ·切片原位分析AmphiUreG基因在成体文昌鱼组织中的表达 | 第58-68页 |
| ·基本原理 | 第59-60页 |
| ·切片原位杂交具体步骤 | 第60-62页 |
| ·切片原位杂交过程 | 第62-64页 |
| ·注意问题：标本的固定和石蜡切片的制备 | 第64页 |
| ·原位杂交中所用到的试剂 | 第64-68页 |
| ·尿素酶检测 | 第68页 |
| ·试验原理 | 第68页 |
| ·尿素酶检测试验具体步骤 | 第68页 |
| 3. 结果 | 第68-79页 |
| ·文昌鱼尿素酶辅助蛋白UreG基因的克隆 | 第68-70页 |
| ·AmphiUreG基因序列分析 | 第70-72页 |
| ·系统进化分析 | 第72-73页 |
| ·RT-PCR分析鉴定文昌鱼尿素酶辅助蛋白UreG基因 | 第73页 |
| ·巢式PCR分析鉴定文昌鱼尿素酶辅助蛋白UreG基因 | 第73-75页 |
| ·组织切片原位杂交 | 第75-79页 |
| ·AmphiUreG RNA探针的合成和标记效率检测 | 第75-77页 |
| ·探针效率检测 | 第77页 |
| ·Dot blot检测探针质量 | 第77-78页 |
| ·组织切片原位杂交 | 第78-79页 |
| ·尿素酶检测结果 | 第79页 |
| 4. 讨论 | 第79-82页 |
| 总结与展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-90页 |
| 附录 | 第90-94页 |
| （一） PCDNA3 的质粒图谱 | 第90-91页 |
| （二） 载体PCDNA3-SFII的构建 | 第91-92页 |
| （三） T7 合成引物RT-PCR产物连接转化后阳性克隆插入片断测序图谱 | 第92-93页 |
| （四） T7 合成引物巢式PCR产物连接转化后阳性克隆插入片断测序图谱 | 第93-94页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第94-95页 |
| 作者简介 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
