| 常用缩略语 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一部分 肿瘤细胞表面受体表达水平与腺病毒感染 | 第19-53页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 材料和方法 | 第21-37页 |
| 材料 | 第21-26页 |
| 一.质粒载体 | 第21页 |
| 二.病毒 | 第21页 |
| 三.细胞株 | 第21页 |
| 四.引物 | 第21-22页 |
| 五、主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 六.材料及试剂盒 | 第23-24页 |
| 七.实验试剂 | 第24-25页 |
| 八、计算机分析软件 | 第25-26页 |
| 实验方法 | 第26-37页 |
| 1.实时荧光定量RT-PCR检测肿瘤细胞CAR的表达 | 第26-28页 |
| 2.间接免疫荧光检测肿瘤细胞表面CAR和integrin的表达 | 第28页 |
| 3.免疫细胞化学染色检测肿瘤细胞CAR和integrin表达 | 第28-29页 |
| 4.Western blot检测肿瘤细胞CAR的表达 | 第29-30页 |
| 5.FCM分析Ad5对不同肿瘤细胞感染效率 | 第30页 |
| 6.腺病毒—柯萨奇病毒受体基因(CAR)全长cDNA的克隆 | 第30-33页 |
| 7.质粒pCDNA3.1-fCAR转染细胞 | 第33-34页 |
| 8.Luciferase活性检测 | 第34-35页 |
| 9.细胞表面CD46表达的检测 | 第35页 |
| 10.Ad5F35-CMV-GFP对肿瘤细胞的感染效率 | 第35-37页 |
| 结果 | 第37-50页 |
| 1.腺病毒—柯萨奇病毒受体基因(CAR)全长cDNA的克隆 | 第37-38页 |
| 2.CAR在不同的肿瘤细胞mRNA水平表达的差异 | 第38-40页 |
| 3.肿瘤细胞表面CAR和integrin FCM分析结果 | 第40-42页 |
| 4.不同肿瘤细胞表面CAR和integrin的免疫组化染色结果 | 第42-43页 |
| 5.Western blot检测不同的肿瘤细胞表面CAR表达结果 | 第43-44页 |
| 6.腺病毒Ad5-CMV-GFP对不同肿瘤细胞的感染效率 | 第44-45页 |
| 7.转染pCDNA3.1-fCAR提高腺病毒Ad-CMV-luc感染肿瘤细胞的效率 | 第45-46页 |
| 8.阻断CAR或Integrin降低腺病毒对肿瘤细胞的感染效率 | 第46-48页 |
| 9.细胞表面CD46的表达水平与Ad5F35-CMV-GFP的感染效率 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-53页 |
| 第二部分 双功能融合分子提高腺病毒对肿瘤细胞的感染效率 | 第53-78页 |
| 引言 | 第53-54页 |
| 材料和方法 | 第54-63页 |
| 材料 | 第54-56页 |
| 一.质粒载体 | 第54页 |
| 二.引物 | 第54-55页 |
| 三.病毒 | 第55页 |
| 四.试剂 | 第55-56页 |
| 五.细胞 | 第56页 |
| 实验方法 | 第56-63页 |
| 1.CAR胞外段编码基因和sCAR-EGF融合基因的克隆 | 第56页 |
| 2.重组腺病毒的包装 | 第56-58页 |
| 3.重组腺病毒的筛选和扩增 | 第58-59页 |
| 4.重组腺病毒的PCR鉴定和目的蛋白表达的检测 | 第59-60页 |
| 5.病毒滴度的测定(TCID_(50)) | 第60-61页 |
| 6.融合蛋白提高腺病毒对肿瘤细胞的感染效率 | 第61-62页 |
| 7.病毒联合感染提高感染效率 | 第62页 |
| 8.RCA的检测 | 第62-63页 |
| 结果 | 第63-76页 |
| 1.sCAR和基因sCAR-EGF的克隆 | 第63-65页 |
| 2.表达融合基因sCAR-EGF和胞外段sCAR的病毒的包装 | 第65-67页 |
| 3.病毒表达产物的鉴定 | 第67-69页 |
| 4.病毒的扩增和空斑纯化 | 第69页 |
| 5.肿瘤细胞表面EGFR表达的检测 | 第69-70页 |
| 6.sCAR-EGF提高Ad-CMV-LUC对肿瘤细胞的感染效率 | 第70-73页 |
| 7.二种腺病毒联合应用提高感染效率 | 第73-74页 |
| 8.anti-EGFR和anti-CAR抗体阻断对感染效率的影响 | 第74-75页 |
| 9.RCA的检测 | 第75-76页 |
| 讨论 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 综述 | 第88-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
