| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词和英汉对照 | 第7-11页 |
| 前言 | 第11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-26页 |
| 1 果树病毒发生危害现状 | 第11-12页 |
| 2 国内外研究状况 | 第12-14页 |
| ·国外研究状况 | 第12-13页 |
| ·国内研究状况 | 第13-14页 |
| 3 果树病毒检测方法 | 第14-17页 |
| ·果树病毒的指示植物检测法 | 第14-15页 |
| ·果树病毒的电子显微镜及血清学检测法 | 第15页 |
| ·果树病毒的分子生物学检测法 | 第15-17页 |
| ·核酸分子杂交技术 | 第16页 |
| ·多聚酶链式反应 | 第16-17页 |
| ·双链 RNA（dsRNA）技术 | 第17页 |
| 4 原位PCR 技术 | 第17-21页 |
| ·原位PCR 技术的种类 | 第17-18页 |
| ·原位逆转录PCR 的基本原理及主要步骤 | 第18-20页 |
| ·对照的设置 | 第20页 |
| ·原位PCR 的应用 | 第20-21页 |
| 5 梨树病毒病害的研究 | 第21-23页 |
| ·梨树病毒病害的种类 | 第21-22页 |
| ·梨树病毒病害的特点 | 第22页 |
| ·梨树病毒的防治 | 第22-23页 |
| 6 果树病毒病研究的现状和发展趋势 | 第23-24页 |
| 7 本研究的目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二部分 实验内容 | 第26-42页 |
| 1 材料和方法 | 第26-32页 |
| ·试验材料和主要试剂仪器 | 第26页 |
| ·供试材料 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·质粒 | 第26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·试剂及酶类 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-32页 |
| ·地高辛标记的cDNA探针的制备 | 第26-28页 |
| ·石蜡切片的制备 | 第28-29页 |
| ·组织预处理 | 第29页 |
| ·库尔勒香梨茎尖切片中苹果褪绿叶斑病毒的原位 RT-PCR 检测 | 第29-30页 |
| ·库尔勒香梨茎尖切片中苹果褪绿叶斑病毒的一步法 RT-PCR 及原位杂交检测 | 第30-31页 |
| ·原位 RT-PCR 及原位杂交产物的免疫检测 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-38页 |
| ·RNA 的提取、PCR 产物的电泳检测及酶切鉴定 | 第32页 |
| ·非放射性标记探针的鉴定 | 第32-33页 |
| ·探针显色灵敏度的检测 | 第33页 |
| ·不同处理对石蜡切片效果的影响 | 第33-34页 |
| ·固定时间的影响 | 第33页 |
| ·脱水时间的影响 | 第33页 |
| ·透明时间的影响 | 第33-34页 |
| ·切片厚度的影响 | 第34页 |
| ·展片方式的影响 | 第34页 |
| ·碱性磷酸酶显色系统可靠性检测 | 第34页 |
| ·库尔勒香梨茎尖切片中苹果褪绿叶斑病毒的检测结果 | 第34-38页 |
| ·原位RT-PCR检测结果 | 第34-35页 |
| ·原位杂交检测结果 | 第35-37页 |
| ·不同处理茎尖组织的检测结果 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-42页 |
| ·固定剂的选用与固定时间的确定 | 第38页 |
| ·切片的防脱 | 第38页 |
| ·反应中蒸发的防止 | 第38-39页 |
| ·蛋白酶消化时间的确定 | 第39页 |
| ·地高辛精标记核苷酸的使用 | 第39页 |
| ·原位 PCR 的反应体系各组分对结果的影响 | 第39页 |
| ·循环次数 | 第39-40页 |
| ·标本的洗涤 | 第40页 |
| ·原位PCR 检测梨病毒的敏感性与特异性 | 第40-41页 |
| ·库尔勒香梨茎尖切片中苹果褪绿叶斑病毒的检测结果讨论 | 第41页 |
| ·进一步研究的设想 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 附录一 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 导师评阅表 | 第53页 |
