| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一部分 引言 | 第13-17页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第17-26页 |
| 1 材料 | 第17-21页 |
| ·菌种 | 第17页 |
| ·质粒 | 第17-18页 |
| ·培养基及培养条件 | 第18页 |
| ·缓冲液、展层剂、显色剂 | 第18-20页 |
| ·工具酶 | 第20页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-26页 |
| ·糖多孢红霉菌总DNA的小量提取制备 | 第21页 |
| ·糖多孢红霉菌总DNA的大量制备 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量提取 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第22-23页 |
| ·糖多孢红霉菌孢子的制备 | 第23页 |
| ·糖多孢红霉菌原生质体制备和转化 | 第23-24页 |
| ·DNA PCR扩增 | 第24页 |
| ·DNA限制性酶切 | 第24页 |
| ·DNA片段的连接 | 第24页 |
| ·DNA电泳分离 | 第24页 |
| ·DNA片段的回收和纯化 | 第24-25页 |
| ·发酵产物的提取 | 第25页 |
| ·发酵产物HPLC初步分离 | 第25页 |
| ·生物活性检测 | 第25页 |
| ·发酵产物质谱鉴定 | 第25-26页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第26-39页 |
| 1 pUC-SRR质粒的构建 | 第26-28页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·pUC-SRR质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·pUC-SRR质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| 2 pWHM3-SRR质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·pWHM3-SRR质粒的构建 | 第28页 |
| ·pWHM3-SRR质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 3 整合体λC3-A、λC3-B和λC3-C的筛选 | 第29页 |
| 4 整合体λC3-A、λC3-B和λC3-C的鉴定 | 第29-30页 |
| 5 λC3-A、λC3-B和λC3-C整合体质粒整合位点的确定 | 第30-32页 |
| ·λC3-A、λC3-B和λC3-C培养液的枯草杆菌抑制试验 | 第30-31页 |
| ·λC3-A、λC3-B和λC3-C发酵产物的薄层色谱分析 | 第31-32页 |
| ·整合体中pWHM3-SRR质粒在染色体上整合的示意图 | 第32页 |
| 6 糖多孢红霉菌λC3-SRR菌株的筛选 | 第32-36页 |
| 7 糖多孢红霉菌λC3-SRR发酵产物的鉴定 | 第36-39页 |
| ·糖多孢红霉菌λC3-SRR发酵产物的薄层色谱分析 | 第36-37页 |
| ·糖多孢红霉菌λC3-SRR发酵产物的质谱分析 | 第37-39页 |
| 第四部分 讨论 | 第39-44页 |
| 1 KR6酶域DNA序列定点突变体λC3-SRR与KR6酶域DNA序列完全敲除突变体M的质谱图比较 | 第39-40页 |
| 2 KR6酶域与SDR家族的关系的研究 | 第40-41页 |
| 3 对SRR三个氨基酸在KR6酶域结合NADPH过程中所发挥作用的研究 | 第41-42页 |
| 4 对λC3-SRR发酵液质谱图中存在少量红霉素(ErA)特征质谱峰的解释 | 第42-44页 |
| 第五部分 总结 | 第44-46页 |
| 1 本研究主要获得的结果 | 第44-45页 |
| ·构建的糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体合成了酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B | 第44页 |
| ·本研究突变位点处的两个精氨酸是KR6酶域的NADPH2′-磷酸结合位点 | 第44页 |
| ·敲除了SRR的KR6酶域可与NADPH微弱结合使得λC3-SRR突变体合成少量的红霉素 | 第44页 |
| ·糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体发酵液中没有副产物2-脱甲基-3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B | 第44-45页 |
| ·糖多孢红霉菌聚酮合成酶KR6酶域属于复合型SDR | 第45页 |
| 2 本论文的创新之处 | 第45页 |
| 3 需进一步研究的问题 | 第45-46页 |
| 论文参考文献 | 第46-49页 |
| 附录(序列分析图谱) | 第49-53页 |
| 综述：红霉素抗菌机制及细菌产生红霉素抗性的机制 | 第53-64页 |
| 综述参考文献 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 硕士期间发表论文 | 第65页 |
