| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·蛋白激发子受体的研究现状 | 第13-16页 |
| ·研究成熟的激发子受体 | 第14-15页 |
| ·其他种类的激发子受体 | 第15-16页 |
| ·蛋白激发子 PeaT1 的研究背景 | 第16-17页 |
| ·PeaT1 诱导抗逆相关蛋白表达 | 第17页 |
| ·PeaT1 诱导烟草产生系统抗性 | 第17页 |
| ·PeaT1 与烟草细胞质膜结合 | 第17页 |
| ·研究蛋白互作的方法 | 第17-21页 |
| ·体外蛋白互作 | 第17-19页 |
| ·体内蛋白互作 | 第19-21页 |
| ·本研究目的和意义 | 第21页 |
| ·研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 蛋白激发子 PeaT1 烟草膜蛋白受体的捕获及鉴定 | 第22-29页 |
| ·材料与方法 | 第22-25页 |
| ·实验仪器与耗材 | 第22页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·获得高纯度的烟草囊膜 | 第25页 |
| ·双向电泳分离膜蛋白 | 第25-26页 |
| ·Far Western Blot 捕获互作蛋白 | 第26-27页 |
| ·质谱鉴定互作蛋白 | 第27-28页 |
| ·小结与讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 互作蛋白 PeaT1-BP 基因克隆和细胞定位 | 第29-41页 |
| ·材料与方法 | 第29-36页 |
| ·实验仪器与耗材 | 第29页 |
| ·实验试剂 | 第29页 |
| ·溶液配制 | 第29页 |
| ·所用的质粒载体 | 第29页 |
| ·烟草叶片总 RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·反转录 PCR | 第30页 |
| ·PCR 产物连入 pMD18-Tsimple 载体中 | 第30-32页 |
| ·重组子转化大肠杆菌及质粒抽提 | 第32-34页 |
| ·瞬时表达 | 第34-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-39页 |
| ·提取高质量烟草 RNA | 第36页 |
| ·反转录 PCR 克隆 PeaT1-BP 基因 | 第36-37页 |
| ·基因 PeaT1-BP 连入 pMD18-T simple 载体 | 第37页 |
| ·蛋白 PeaT1-BP 定位在烟草细胞膜 | 第37-39页 |
| ·小结与讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 蛋白 PeaT1-BP 的原核表达与纯化 | 第41-55页 |
| ·材料与方法 | 第41-50页 |
| ·实验仪器与耗材 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·溶液配制 | 第41-42页 |
| ·表达载体及表达菌株 | 第42页 |
| ·表达体系的构建 | 第42-47页 |
| ·蛋白 PeaT1-BP 的原核表达 | 第47页 |
| ·蛋白 PeaT1-BP 表达量的初步检测 | 第47-48页 |
| ·蛋白 PeaT1-BP 表达条件的优化 | 第48-49页 |
| ·蛋白 PeaT1-BP 的纯化 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·用载体 pET28a 表达蛋白 PeaT1-BP | 第50页 |
| ·用载体 pGEX-6P-1 表达蛋白 PeaT1-BP | 第50-51页 |
| ·用载体 pET-30 His 表达蛋白 PeaT1-BP | 第51-52页 |
| ·确定蛋白 PeaT1-BP 最优表达条件 | 第52-53页 |
| ·亲和层析纯表达蛋白 | 第53页 |
| ·阴离子交换柱层析进一步纯化蛋白 | 第53-54页 |
| ·小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 蛋白 PeaT1 和 PeaT1-BP 结合验证 | 第55-68页 |
| ·材料与方法 | 第55-63页 |
| ·实验仪器与耗材 | 第55页 |
| ·实验试剂 | 第55页 |
| ·溶液配制 | 第55-56页 |
| ·Far-Western Blot | 第56-57页 |
| ·免疫共沉淀 | 第57-60页 |
| ·双分子荧光互补标记 | 第60-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-66页 |
| ·Far-Western Blot 方法验证互作蛋白 | 第63-64页 |
| ·免疫共沉淀方法验证互作蛋白 | 第64-65页 |
| ·BiFC 验证蛋白结合 | 第65-66页 |
| ·小结与讨论 | 第66-68页 |
| 第六章 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
