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苏云金芽胞杆菌HBF-18菌株毒力相关基因的克隆与活性研究

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 绪论第15-35页
   ·苏云金芽胞杆菌及其作为生防微生物研究历史第15-16页
   ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白分类及杀虫活性第16-17页
   ·cry 基因的鉴定第17-18页
   ·苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的结构及功能第18-21页
     ·DomainⅠ第19-20页
     ·DomainⅡ第20页
     ·Domain Ⅲ第20-21页
   ·杀虫晶体蛋白的作用机制第21-23页
     ·Bravo 模型第21-22页
     ·Zhang 模型第22-23页
     ·Jurat-Fuentes 模型第23页
   ·营养期杀虫蛋白(Vegetative insecticidal proteins ,VIPs)第23-25页
     ·营养期杀虫蛋白分类及杀虫活性第24页
     ·Vip 蛋白的结构、功能及作用机理第24-25页
   ·苏云金芽胞杆菌杀虫蛋白的应用及局限性第25-29页
     ·苏云金芽胞杆菌的应用第25-28页
     ·苏云金芽胞杆菌应用的局限性第28-29页
   ·苏云金芽胞杆菌的增效途径第29-31页
   ·蛴螬及其危害现状第31页
   ·苏云金芽胞杆菌与蛴螬防治第31-32页
   ·本研究的立题依据、研究内容和目的意义第32-35页
     ·立题依据第32-34页
     ·研究内容第34页
     ·目的意义第34-35页
第二章 材料与方法第35-50页
   ·实验材料第35-38页
     ·实验所用菌株和质粒第35-36页
     ·试剂第36-38页
     ·供试昆虫第38页
     ·所用仪器型号第38页
   ·研究方法第38-50页
     ·Bt 基因组的提取第38-39页
     ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取第39页
     ·获得 HBF-18 基因组 DNA 序列第39页
     ·获得新杀虫蛋白基因-基因推测第39-40页
     ·新基因的序列分析第40页
     ·RNA 的提取与纯化第40页
     ·RT-PCR第40-41页
     ·新基因在大肠杆菌中的克隆第41-45页
     ·新基因在大肠杆菌中的表达研究第45-46页
     ·新基因在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中的表达第46-48页
     ·Bt 菌株杀虫活性的测定第48-49页
     ·生测数据处理与分析第49-50页
第三章 结果与分析第50-71页
   ·获得新的杀虫蛋白基因序列第50页
   ·序列分析第50-54页
     ·cry8 -like 基因序列分析第50-52页
     ·vip1,vip2 基因序列分析第52页
     ·Vip1,Vip2 蛋白信号肽预测第52-53页
     ·新基因在 HBF-18 菌株中的转录分析第53-54页
   ·新基因在大肠杆菌中的克隆及表达第54-59页
     ·新基因的 PCR 扩增第54-55页
     ·新基因异源表达载体的构建第55-57页
     ·新基因在大肠杆菌中的表达第57-59页
   ·新基因在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中的表达第59-63页
     ·新基因在大肠杆菌中的克隆第59-61页
     ·工程菌电镜照片第61-62页
     ·Cry 蛋白的提取及检测第62页
     ·硫酸铵沉淀法提取 Vip1、Vip2 分泌蛋白第62-63页
   ·新基因的序列及分析第63-65页
   ·杀虫活性测定结果第65-68页
     ·Cry8 对铜绿丽金龟生物活性初筛结果第65页
     ·Cry8 对小菜蛾生物活性初筛结果第65页
     ·不同重组菌株及组合对暗黑鳃金龟生物活性测定结果及分析第65-68页
   ·讨论第68-71页
第四章 结论第71-72页
参考文献第72-83页
致谢第83-85页
作者简历第85页

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