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稻瘟病菌T-DNA插入致病突变体的分析

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-9页
1 前言第9-11页
2 稻瘟病菌致病性及其变异机制的研究进展第11-18页
   ·稻瘟病菌的致病性分化第11-12页
   ·稻瘟病菌无毒基因及其变异研究第12-14页
   ·稻瘟病菌的变异机制第14-18页
     ·异核现象第14页
     ·无性重组第14-15页
     ·准性重组第15页
     ·有性重组第15页
     ·突变第15-16页
     ·迁移第16-17页
     ·寄主定向选择第17-18页
3 利用突变技术研究稻瘟病菌致病性的研究进展第18-25页
   ·自发突变第18页
   ·人工诱变突变体的构建与利用第18-19页
   ·分子标签技术突变体库构建上的广泛应用第19-25页
     ·限制性酶介导整合第19-20页
     ·转座子列阵基因打断技术第20-21页
     ·根癌农杆菌介导的遗传转化第21-23页
     ·基因捕捉和激活标签在T-DNA和转座子插入突变库构建中的应用第23-24页
     ·其它方法第24-25页
4 材料与方法第25-34页
   ·供试菌株第25页
   ·培养基第25-26页
   ·抗生素第26页
   ·T-DNA插入突变体库的构建第26页
   ·致病性测定第26-28页
     ·稻瘟菌株的扩大培养及产孢第26-27页
     ·育苗及接种方法第27页
     ·调查与记载第27页
     ·野生型菌株FJ95054B接种第27页
     ·突变体致病性变异的分析第27-28页
   ·稻瘟病菌基因组DNA的提取及提取质量的检测第28页
   ·质粒pBHt1的提取及检测第28-29页
   ·T-DNA插入的分子检测第29-32页
     ·普通PCR(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测方法第29页
     ·热不对称嵌套PCR方法检测第29-32页
     ·DNA的酶切和Southern杂交第32页
   ·DNA片段的回收、克隆和测序第32-33页
     ·DNA片段的回收第32页
     ·DNA片段与载体pGEM-T Easy的连接第32-33页
   ·测序与序列分析第33-34页
5 结果与分析第34-45页
   ·稻瘟病菌FJ95054B的T-DNA插入突变体库的构建第34-35页
   ·致病性变异的T-DNA突变体筛选第35页
   ·无毒变为有毒的感病病斑的单孢分离与重新接种验证第35-38页
   ·致病性交异的突变体的分子分析第38-42页
     ·普通PCR方法第38页
     ·T-DNA插入的Southern分析第38-40页
     ·T-DNA插入的侧翼序列的扩增第40-42页
   ·T-DNA插入侧翼序列的克隆第42页
   ·T-DNA插入侧翼序列的结构及其功能推导第42-45页
6 问题与讨论第45-49页
   ·关于转化第45页
   ·T-DNA突变体库的饱和容量第45-46页
   ·快速筛选稻瘟病菌所需基因的突变体的途径第46页
   ·稻瘟病菌菌株致病性的稳定性第46-47页
   ·T-DNA插入分析第47页
   ·TAIL-PCR第47-49页
7 结论与今后的工作第49-51页
   ·结论第49页
   ·有待进一步研究的问题第49-51页
参考文献第51-56页
致谢第56页

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