| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-49页 |
| 一、 杆状病毒的侵染过程及作用机制 | 第18-33页 |
| ·杆状病毒简介 | 第18-21页 |
| ·杆状病毒对宿主幼虫的感染 | 第21-22页 |
| ·杆状病毒生活史 | 第22-33页 |
| ·ODV侵入宿主中肠细胞 | 第23-24页 |
| ·BV病毒粒子侵入宿主细胞 | 第24页 |
| ·病毒的复制与装配 | 第24-27页 |
| ·病毒粒子的包被与成熟 | 第27-33页 |
| 二、 杆状病毒的应用 | 第33-46页 |
| ·杆状病毒为分子生物学和分子病毒学研究提供模型和方法 | 第33页 |
| ·杆状病毒是优秀的真核表达载体之一 | 第33-37页 |
| ·概述 | 第33-35页 |
| ·杆状病毒作为表达系统的优缺点 | 第35-36页 |
| ·影响目的基因表达的因素 | 第36-37页 |
| ·杆状病毒杀虫剂应用于害虫生物防治 | 第37-40页 |
| ·表达Bt毒蛋白的重组病毒 | 第38页 |
| ·表达昆虫特异性神经毒素的重组病毒 | 第38-39页 |
| ·表达昆虫激素的重组病毒 | 第39页 |
| ·缺失脱皮甾醇-UDP-糖基转移酶的重组病毒 | 第39-40页 |
| ·表达昆虫特异性酶的重组病毒 | 第40页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体及其在医学研究中的前景 | 第40-46页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体的可行性 | 第41-42页 |
| ·杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中的稳定表达 | 第42-43页 |
| ·杆状病毒作为体内基因投送载体 | 第43页 |
| ·杆状病毒进入哺乳动物细胞的机制 | 第43-44页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体在医学中的应用 | 第44-46页 |
| 三、 本研究的背景、目的与意义 | 第46-49页 |
| 第二章 p74缺陷型重组杆状病毒的构建 | 第49-77页 |
| ·引言 | 第49-50页 |
| ·材料和方法 | 第50-66页 |
| ·质粒、菌株、酶、试剂 | 第50-51页 |
| ·血清、培养基、细胞和病毒 | 第51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒转化 | 第51-53页 |
| ·质粒DNA的提取和纯化 | 第53-56页 |
| ·限制性核酸内切酶消化反应 | 第56页 |
| ·DNA片段的回收 | 第56-57页 |
| ·载体补平、脱磷酸化与平末端连接 | 第57-58页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第58-59页 |
| ·菌落PCR初步鉴定阳性重组质粒 | 第59页 |
| ·DNA测序 | 第59页 |
| ·细胞培养、冻存和复苏 | 第59-60页 |
| ·病毒(BV)感染单层培养细胞 | 第60-61页 |
| ·病毒粒子(buddedvirus, BV)和包涵体分离 | 第61-62页 |
| ·空斑滴定和计数 | 第62-63页 |
| ·空斑纯化 | 第63-64页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第64-65页 |
| ·质粒DNA对细胞的转染 | 第65-66页 |
| ·研究结果 | 第66-72页 |
| ·p74基因的PCR扩增 | 第66-68页 |
| ·p74缺陷型中间载体的构建 | 第68-71页 |
| ·p74缺陷型病毒的构建、鉴定和纯化 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-77页 |
| 第三章 P74是杆状病毒ODV在宿主中肠中初级感染的必需因子 | 第77-102页 |
| ·引言 | 第78-79页 |
| ·材料和方法 | 第79-84页 |
| ·Bac-to-Bac系统 | 第79页 |
| ·质粒和载体 | 第79-82页 |
| ·重组Bacmid DNA(＞100 kb)的提取与制备 | 第82-83页 |
| ·用Bac-to-Bac表达系统构建表达型重组病毒 | 第83-84页 |
| ·病毒毒力的生物测定 | 第84页 |
| ·芽生型病毒BV一步生长曲线测定 | 第84页 |
| ·研究结果 | 第84-99页 |
| ·多角体阳性且P74超表达(polh+-p74++)重组病毒的构建和鉴定 | 第84-90页 |
| ·用重组病毒表达的P74和Polh蛋白以及多角体的形成 | 第90-93页 |
| ·p74基因的缺失、过表达对病毒在培养细胞中增殖的影响 | 第93-95页 |
| ·p74~-缺陷型病毒的BV能通过注射感染宿主幼虫 | 第95-96页 |
| ·p74~-病毒包涵体、p74++病毒包涵体对病毒毒力的影响 | 第96-98页 |
| ·野生型病毒对p74缺陷型病毒感染力的拯救。 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| 第四章 P74蛋白的表达、纯化及其对p74缺陷型病毒的拯救 | 第102-116页 |
| ·引言 | 第102-103页 |
| ·材料和方法 | 第103-107页 |
| ·试剂 | 第103页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第103-104页 |
| ·Western blot | 第104页 |
| ·Ni++-NTA亲和树脂纯化靶蛋白 | 第104-106页 |
| ·Brad ford法测定蛋白质浓度 | 第106-107页 |
| ·研究结果 | 第107-114页 |
| ·P74蛋白在昆虫细胞中的表达和纯化 | 第107-109页 |
| ·提纯的P74蛋白对p74缺陷型病毒包含体感染力的拯救 | 第109-113页 |
| ·P74蛋白不能拯救异源p74-重组病毒的感染力 | 第113-114页 |
| ·讨论 | 第114-116页 |
| 第五章 P74蛋白在离体细胞中的定位 | 第116-127页 |
| ·引言 | 第117页 |
| ·材料和方法 | 第117-120页 |
| ·试剂和载体 | 第117页 |
| ·引物 | 第117-118页 |
| ·重组质粒的构建 | 第118页 |
| ·重组病毒rHa-p74gfp的构建 | 第118-120页 |
| ·激光共聚焦显微镜观察荧光细胞 | 第120页 |
| ·研究结果 | 第120-125页 |
| ·高表达P74-GFP融合蛋白的重组病毒的鉴定 | 第120-121页 |
| ·绿色融合蛋白P74-GFP在培养细胞中的定位 | 第121-125页 |
| ·讨论 | 第125-127页 |
| 第六章 P74蛋白和140中肠细胞BBMV的特异性结合及P74潜在受体的发现 | 第127-138页 |
| ·引言 | 第128-129页 |
| ·材料与方法 | 第129-132页 |
| ·P74蛋白的表达与纯化 | 第129页 |
| ·幼虫中肠的分离 | 第129页 |
| ·BBMV的制备 | 第129页 |
| ·ELISA(酶联免疫吸附检测方法) | 第129-131页 |
| ·体外Pull-down分析(Pull-down assay in vitro) | 第131-132页 |
| ·研究结果 | 第132-137页 |
| ·P74以可饱和方式特异性地与宿主幼虫中肠BBMV结合 | 第132-135页 |
| ·P74蛋白潜在受体的发现 | 第135-137页 |
| ·讨论 | 第137-138页 |
| 第七章 总讨论 | 第138-146页 |
| 本研究的特色和创新点 | 第146-148页 |
| 参考文献 | 第148-169页 |
| 博士期间发表和待发表的论文 | 第169-170页 |
| 致谢 | 第170-171页 |
