| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 一 文献综述 | 第8-26页 |
| ·前言 | 第8页 |
| ·人α肿瘤坏死因子的基因结构和蛋白质结构 | 第8-9页 |
| ·肿瘤坏死因子结构与功能的关系 | 第9-12页 |
| ·N-端和C-端的重要性 | 第9页 |
| ·氨基酸替换对hTNF生物学活性的影响 | 第9-11页 |
| ·利用抗体进行抗原决定簇定位 | 第11-12页 |
| ·肿瘤坏死因子的一般性质和生物学活性 | 第12-15页 |
| ·一般性质 | 第12页 |
| ·肿瘤坏死因子的生物学活性 | 第12-15页 |
| ·TNF的抗肿瘤活性 | 第12-14页 |
| ·免疫调节作用 | 第14页 |
| ·TNF与其他细胞因子的协同作用 | 第14-15页 |
| ·影响TNF合成的因素 | 第15页 |
| ·肿瘤坏死因子的临床应用 | 第15-16页 |
| ·肿瘤坏死因子和恶液素的关系及其毒副作用 | 第15-16页 |
| ·临床应用肿瘤坏死因子的展望 | 第16页 |
| ·肿瘤坏死因子的基因改造和表达 | 第16-21页 |
| ·肿瘤坏死因子的基因改造:PCR技术 | 第16-19页 |
| ·肿瘤坏死因子的表达 | 第19-21页 |
| ·在植物中的表达 | 第19页 |
| ·肿瘤坏死因子cDNA在原核细胞中的表达 | 第19-20页 |
| ·肿瘤坏死因子cDNA在真核细胞中的表达 | 第20-21页 |
| ·肿瘤坏死因子的发酵生产 | 第21-22页 |
| ·蛋白质分离纯化的一般步骤 | 第22-24页 |
| ·细胞破碎的方法 | 第22页 |
| ·蛋白质的浓缩和脱盐 | 第22-23页 |
| ·蛋白质的层析分离 | 第23-24页 |
| ·凝胶过滤 | 第23-24页 |
| ·离子交换层析 | 第24页 |
| ·人肿瘤坏死因子-α的提纯 | 第24-26页 |
| 二 人肿瘤坏死因子的鉴定与生产菌株的筛选 | 第26-43页 |
| ·试验材料和设备 | 第26-30页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·试验试剂 | 第26-27页 |
| ·常用溶液的配制 | 第27-29页 |
| ·试验设备 | 第29-30页 |
| ·试验方法和步骤 | 第30-34页 |
| ·菌株活化 | 第30-31页 |
| ·DNA序列分析 | 第31-32页 |
| ·菌种的发酵及粗提 | 第32页 |
| ·rhTNF的活性检测 | 第32-33页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第33-34页 |
| ·试验结果与讨论 | 第34-42页 |
| ·pTNF320质粒的初步鉴定 | 第34-35页 |
| ·TNF cDNA序列检测 | 第35-41页 |
| ·高效表达菌株的筛择 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 三 新的重组人肿瘤坏死因子表达菌株的构建 | 第43-52页 |
| ·试验材料、试剂和设备 | 第43-44页 |
| ·试验材料 | 第43-44页 |
| ·试验试剂和设备 | 第44页 |
| ·新载体的构建 | 第44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-51页 |
| ·新载体的构建过程 | 第44-49页 |
| ·诱导条件的优化 | 第49-51页 |
| ·诱导时间的影响 | 第49-50页 |
| ·诱导剂浓度的影响 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 四 大规模工艺提取之一:珠磨破碎释放肿瘤坏死因子 | 第52-72页 |
| ·前言 | 第52-54页 |
| ·破碎机理 | 第54-56页 |
| ·影响因素 | 第56-61页 |
| ·珠磨机的设计参数 | 第56-58页 |
| ·搅拌桨类型 | 第56-57页 |
| ·搅拌桨的桨叶间隔 | 第57页 |
| ·破碎室 | 第57-58页 |
| ·珠液分离器 | 第58页 |
| ·操作参数 | 第58-60页 |
| ·玻璃珠粒径 | 第58-59页 |
| ·玻璃珠装珠量 | 第59页 |
| ·搅拌速率 | 第59页 |
| ·流量的影响 | 第59-60页 |
| ·细胞体系参数 | 第60-61页 |
| ·细胞膜的结构 | 第60页 |
| ·细胞浓度 | 第60页 |
| ·破碎液粘度 | 第60-61页 |
| ·动力学方程研究 | 第61-63页 |
| ·细胞破碎实验 | 第63-71页 |
| ·试验材料，试剂和设备 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·实验试剂 | 第63页 |
| ·实验设备 | 第63页 |
| ·试验方法 | 第63页 |
| ·试验结果和讨论 | 第63-71页 |
| ·蛋白释放动力学 | 第63-64页 |
| ·间歇破碎动力学 | 第64-65页 |
| ·连续破碎动力学 | 第65-66页 |
| ·破碎过程中的温度控制 | 第66-70页 |
| ·高流量多循环对于细胞破碎的影响 | 第70页 |
| ·正交优化破碎条件 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 五 大规模工艺提取之一:集成化初提取工艺研究 | 第72-80页 |
| ·前言 | 第72页 |
| ·材料与方法 | 第72-73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-79页 |
| ·初步联合热变性与硫酸铵沉淀的粗提取工艺 | 第73页 |
| ·几种粗提取组合工艺的比较 | 第73-79页 |
| ·热变性与40％硫酸铵沉淀的先后顺序对目标蛋白纯化的影响 | 第75-77页 |
| ·离心对目标蛋白纯化的影响 | 第77-79页 |
| ·结论 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 建议 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 发表论文 | 第90页 |