| 前言 | 第1-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| ·乙醛酸的性质及用途 | 第12页 |
| ·化学法生产乙醛酸的进展 | 第12-13页 |
| ·生物法制备乙醛酸 | 第13-18页 |
| ·生物法合成乙醛酸的途径 | 第13页 |
| ·生物法所用两种酶的性质及用途 | 第13-15页 |
| ·乙醇酸氧化酶和过氧化氢酶的研究现状 | 第15-18页 |
| ·乙醇酸氧化酶 | 第15-16页 |
| ·过氧化氢酶 | 第16-18页 |
| ·双酶反应体系与酶固定化 | 第18-20页 |
| ·用基因工程菌生产乙醛酸 | 第20-25页 |
| ·用E.coli表达乙醇酸氧化酶 | 第21页 |
| ·用Saccharomyces cerevisiae表达乙醇酸氧化酶 | 第21页 |
| ·用Aspergillus nidulans(冠状构巢曲霉)表达乙醇酸氧化酶 | 第21-22页 |
| ·用Hansenula pohymorpha(汉氏多形酵母)表达乙醇酸氧化酶 | 第22页 |
| ·用Pichia pastoris表达乙醇酸氧化酶 | 第22-24页 |
| ·用基因工程菌催化反应所需条件的研究 | 第24-25页 |
| ·小结 | 第25-29页 |
| 第二章 菠菜乙醇酸氧化酶基因的克隆 | 第29-44页 |
| ·实验材料、方法和内容 | 第29-40页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·质粒、菌株及培养条件 | 第29页 |
| ·酶和试剂 | 第29-31页 |
| ·药品 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-40页 |
| ·实验结果与讨论 | 第40-42页 |
| ·乙醇酸氧化酶cDNA的克隆 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·小结 | 第42-44页 |
| 第三章 菠菜乙醇酸氧化酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第44-64页 |
| ·实验材料、方法和内容 | 第44-52页 |
| ·实验材料 | 第44-47页 |
| ·质粒、菌株和培养条件 | 第44-46页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第47-48页 |
| ·GO在大肠杆菌中诱导表达 | 第48页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第48页 |
| ·表达产物的定位 | 第48页 |
| ·酶活的测定 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第49-50页 |
| ·实验内容 | 第50-52页 |
| ·PCR扩增 | 第50页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·诱导表达 | 第51页 |
| ·表达产物的分析定位 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第51页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第51页 |
| ·不同IPTG浓度和D600值对诱导表达的影响 | 第51-52页 |
| ·实验结果及分析 | 第52-63页 |
| ·表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·GO在大肠杆菌中诱导表达 | 第53-59页 |
| ·在不同IPTG浓度和D600值进行诱导对E.coli BL21(DE3)(pET-22b(+)-GO)表达乙醇酸氧化酶的影响 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第四章 幽门螺杆菌过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第64-72页 |
| ·实验材料、方法和内容 | 第64-67页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·质粒、菌株和培养条件 | 第64-65页 |
| ·试剂 | 第65页 |
| ·主要仪器设备 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-66页 |
| ·实验步骤 | 第66-67页 |
| ·诱导表达 | 第66-67页 |
| ·表达产物的分析定位 | 第67页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第67页 |
| ·酶活的测定 | 第67页 |
| ·实验结果和讨论 | 第67-70页 |
| ·实验结果 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-72页 |
| 第五章 乙醇酸氧化酶基因与过氧化氢酶基因的共表达 | 第72-82页 |
| ·实验材料、方法和内容 | 第72-78页 |
| ·实验材料 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72页 |
| ·实验内容 | 第72-78页 |
| ·构建大肠杆菌BL21(DE3)(pKS20+／pET-22b(+)-CAT) | 第72-73页 |
| ·构建大肠杆菌BL21(DE3)(pET-22b(+)-CAT-GO) | 第73-78页 |
| ·实验结果讨论 | 第78-81页 |
| ·实验结果 | 第78-80页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)(pKS20+／pET-22b(+)-CAT)的表达情况 | 第78页 |
| ·共表达载体的构建 | 第78-80页 |
| ·讨论 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 第六章 结论 | 第82-85页 |
| 问题与建议 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附录一 | 第88-89页 |
| 附录二 | 第89-90页 |
