| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 前言 | 第10-18页 |
| 1 内皮抑素的概述 | 第10-11页 |
| 2 腺病毒载体的概述 | 第11-14页 |
| 3 信号肽的概述 | 第14-15页 |
| 4 本研究的设计思路 | 第15-17页 |
| 5 主要流程 | 第17-18页 |
| 第一章 不同信号肽引导的Endo 基因的获得 | 第18-29页 |
| 1 实验目的及流程 | 第18-19页 |
| 2 实验材料及仪器 | 第19-20页 |
| 3 方法 | 第20-25页 |
| ·引物序列设计 | 第20-21页 |
| ·四种信号肽引导的Endo 基因的PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第22页 |
| ·T 载体的连接及转化 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pUCmT-IwE、pUCmT-Im E、pUCmT-KIwE、pUCmT-KImE 的鉴定 | 第23-25页 |
| 4 结果 | 第25-28页 |
| ·四种信号肽引导的Endo 基因的PCR 扩增并纯化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pUCmT-IwE、pUCmT-Im E、pUCmT-KIwE、pUCmT-KImE 的鉴定 | 第26-28页 |
| 5 小结 | 第28-29页 |
| 第二章 穿梭质粒pDC315（io）-IwE、pDC315（io）-ImE、pDC315（io）-KIwE、pDC315（io）-KIm E 的构建 | 第29-40页 |
| 1 实验目的及流程 | 第29-30页 |
| 2 材料与仪器 | 第30-31页 |
| 3 方法 | 第31-35页 |
| ·pDC315（io）-IwE、pDC315（io）-ImE、pDC315（io）--KIwE、pDC315（io）-KImE 的连接及转化 | 第31-33页 |
| ·重组质粒pDC315（io）-IwE、pDC315（io）-ImE、pDC315（io）--KIwE、pDC315（io）-KImE 的鉴定 | 第33-35页 |
| 4 结果 | 第35-39页 |
| ·pDC315（io）载体的EcoR I 和Sal I 双酶切片断的回收 | 第35-36页 |
| ·IwE 片断的EcoR I 和Sal I 双酶切及纯化 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pDC315（io）-IwE 的PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pDC315（io）-IwE 的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·穿梭载体pDC315（io）-IwE 的测序鉴定 | 第38-39页 |
| 5 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 重组腺病毒载体rAd-IwE、rAd-ImE、rAd- -KIwE、rAd-KImE 的构建及筛选 | 第40-49页 |
| 1 实验目的及流程 | 第40-41页 |
| 2 材料与仪器 | 第41-42页 |
| 3 方法 | 第42-46页 |
| ·重组腺病毒载体rAd-IwE、rAd-ImE、rAd-KIwE、rAd-KImE 的构建及PCR 鉴定 | 第42-45页 |
| ·重组腺病毒的扩增、纯化及滴度颗粒数的测定 | 第45-46页 |
| 4 结果 | 第46-48页 |
| ·重组质粒pDC315（io）-IwE 与腺病毒骨架质粒pBHGloxAE133cre 的共转染 | 第46页 |
| ·腺病毒野毒基因的PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第47-48页 |
| ·腺病毒的扩增、纯化及滴度颗粒数的测定 | 第48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 四种重组腺病毒载体rAd-IwEr、Ad-ImEr、Ad-KIwEr、Ad-KImE 在NCI-H460细胞中的表达及表达水平的比较 | 第49-62页 |
| 1 实验目的及流程 | 第49-50页 |
| 2 材料与仪器 | 第50-51页 |
| 3 方法 | 第51-54页 |
| ·NCI-H460 细胞培养 | 第51页 |
| ·不同病毒滴度感染NCI-H460 后表达水平的比较 | 第51-52页 |
| ·重组腺病毒以5MOI 感染NCI-H460 后，不同时间表达水平的比较 | 第52-53页 |
| ·第四天各病毒感染表达的水平比较 | 第53-54页 |
| 4 结果 | 第54-60页 |
| ·不同滴度的rAd-ImE、rAd-KImE 在NCI-H460 细胞表达水平的比较 | 第54-55页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第55-56页 |
| ·四种重组腺病毒不同时间Endo 表达水平的检测 | 第56-59页 |
| ·第四天六种重组腺病毒rAd-IwE、rAd-ImE、rAd-KIwE、rAd-KImE、rAd-EGFP、rAd-GCSEDO 感染NCI-H460 细胞的表达水平比较 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-62页 |
| 讨论 | 第62-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读学位期间发表的相关学术论文 | 第73-75页 |
