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鸡传染性支气管炎病毒的分离及N基因、S1基因的序列分析

摘要第1-10页
Abstract第10-12页
第一章 综述第12-21页
 1 国内外流行情况第12页
 2 病原学第12-14页
   ·分类地位第12-13页
   ·形态特征第13页
   ·理化特性第13页
   ·血凝特性及干扰现象第13-14页
   ·培养特性第14页
 3 临床致病型第14-15页
   ·呼吸型第14页
   ·生殖道型第14页
   ·肾型第14页
   ·肠型第14-15页
   ·腺胃型第15页
   ·其他第15页
 4 IBV 分子生物学研究进展第15-19页
   ·IBV 基因组结构第15-16页
   ·IBV 编码蛋白及其生物学功能第16-18页
     ·N 蛋白第16页
     ·M 蛋白第16-17页
     ·S 蛋白第17页
     ·E 蛋白第17页
     ·非结构蛋白第17-18页
   ·IBV 抗原位点第18页
   ·IBV 遗传变异第18-19页
 5 存在问题第19页
 6 研究意义第19-21页
第二章 材料和方法第21-33页
 1 试验材料第21-22页
   ·主要试剂第21页
   ·主要试验仪器第21-22页
   ·其他第22页
 2 试验内容与方法第22-33页
   ·病料的采取和处理第22页
   ·病毒的分离第22页
   ·血凝试验(HA)第22-23页
   ·鸡胚接毒试验第23页
   ·SPF 雏鸡攻毒试验第23页
   ·RT-PCR 鉴定第23-25页
     ·引物的设计与合成第23页
     ·病毒 RNA 提取第23-24页
     ·一步法 RT-PCR 扩增第24-25页
   ·N 基因的克隆与序列测定第25-29页
     ·引物设计与合成第25页
     ·病毒 RNA 提取第25页
     ·一步法 RT-PCR 扩增第25-26页
     ·PCR 产物的纯化第26页
     ·DH5α感受态细胞的制备第26-27页
     ·pMD18-T 载体与纯化 PCR 产物的连接第27页
     ·连接产物的转化第27页
     ·重组质粒的提取第27-28页
     ·重组质粒的 PCR 鉴定第28-29页
     ·IBV N 基因序列测定与分析第29页
   ·S1 基因的克隆与序列测定第29-31页
     ·引物设计第29页
     ·病毒 RNA 提取第29页
     ·一步法 RT-PCR 扩增第29-30页
     ·PCR 产物的纯化第30页
     ·DH5α感受态细胞的制备第30页
     ·pMD18-T 载体与纯化 PCR 产物的连接第30页
     ·连接产物的转化第30页
     ·重组质粒的提取第30页
     ·重组质粒的 PCR 鉴定第30-31页
     ·IBV S1 基因序列测定与分析第31页
   ·血清交叉中和实验第31-33页
     ·IBV 阳性血清制备第31页
     ·气管环组织培养第31页
     ·TOC-ID50的测定第31-32页
     ·血清交叉中和试验第32-33页
第三章 试验结果第33-51页
 1 病毒的分离与鸡胚接毒试验第33页
 2 HA 试验第33页
 3 SPF 雏鸡攻毒试验第33-34页
 4 RT-PCR 鉴定结果第34-35页
 5 N 基因的克隆第35-36页
   ·N 基因 RT-PCR 扩增第35页
   ·纯化的 PCR 产物电泳鉴定第35页
   ·重组质粒的 PCR 鉴定第35-36页
 6 S1 基因的克隆第36-37页
   ·RT-PCR 扩增第36页
   ·纯化的 PCR 产物电泳鉴定第36-37页
   ·重组质粒的 PCR 鉴定第37页
 7 N 基因、S1 基因序列测定与分析第37-44页
   ·N 基因序列测定、同源性比较及进化树分析第37-39页
   ·N 基因推导氨基酸的序列分析第39-41页
   ·S1 基因序列测定、同源性比较及进化树分析第41-42页
   ·S1 基因推导氨基酸的序列分析第42-44页
 8 IBV 血清交叉中和试验结果第44-51页
   ·TOC-ID50的测定第44-46页
     ·GY 株 TOC-ID50的测定与计算第45-46页
     ·HQ 株 TOC-ID50的测定与计算第46页
     ·H120 疫苗株 TOC-ID50的测定与计算第46页
   ·血清交叉中和试验第46-51页
     ·GY 病毒与 GY 血清交叉中和试验结果第47页
     ·GY 病毒与 HQ 血清交叉中和试验结果第47页
     ·GY 病毒与 H120 血清交叉中和试验结果第47-48页
     ·HQ 病毒与 HQ 血清交叉中和试验结果第48页
     ·HQ 病毒与 GY 血清交叉中和试验结果第48页
     ·HQ 病毒与 H120 血清交叉中和试验结果第48-49页
     ·H120 病毒与 H120 血清交叉中和试验结果第49页
     ·H120 病毒与 GY 血清交叉中和试验结果第49页
     ·H120 病毒与 HQ 血清交叉中和试验结果第49-50页
     ·能保护 50%气管环的血清最高稀释倍数第50页
     ·分离株、疫苗株之间血清交叉中和相关性第50-51页
第四章 讨论第51-54页
 1 病毒的分离与鸡胚接毒试验第51页
 2 HA 试验第51页
 3 序列测定与分析第51-53页
 4 血清交叉中和试验第53-54页
第五章 结论第54-55页
参考文献第55-61页
附录第61-63页
致谢第63页

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