| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 绪论 | 第11-25页 |
| ·多杀菌素的研究进展 | 第11-17页 |
| ·结构 | 第11-13页 |
| ·作用机理 | 第13-14页 |
| ·生物合成 | 第14-17页 |
| ·多杀菌素产生菌的菌种特征、发酵条件和分离检测 | 第17-20页 |
| ·菌种特征 | 第17-18页 |
| ·发酵条件 | 第18-19页 |
| ·分离检测 | 第19-20页 |
| ·刺糖多孢菌的改造和培养基优化 | 第20-23页 |
| ·常规理化诱变育种筛选多杀菌素高产菌 | 第20页 |
| ·多杀菌素发酵培养基的优化 | 第20-21页 |
| ·通过基因改造提高多杀菌素产量 | 第21-22页 |
| ·多杀菌素的异源表达 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-34页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·缓冲液 | 第27页 |
| ·抗生素 | 第27-28页 |
| ·主要仪器试剂 | 第28-29页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第29页 |
| ·刺糖多孢菌培养条件 | 第29-30页 |
| ·发酵液中多杀菌素浓度的高效液相色谱检测 | 第30页 |
| ·DNA 的小量提取 | 第30-31页 |
| ·引物合成 | 第31页 |
| ·PCR 扩增 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·DNA 片段回收 | 第32页 |
| ·测序 | 第32页 |
| ·BAC 质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·软件环境 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-56页 |
| ·刺糖多孢菌发酵培养基的神经网络优化 | 第34-43页 |
| ·基于神经网络的发酵建模 | 第34-39页 |
| ·基于遗传算法优化最优培养基 | 第39-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| ·刺糖多孢菌全基因组 BAC 文库的建立 | 第43-48页 |
| ·包埋法制备刺糖多孢菌的全基因组 plug 及不完全酶切脉冲电泳确认 | 第44页 |
| ·BAC 文库的构建 | 第44-46页 |
| ·文库质量的确认 | 第46-47页 |
| ·文库的扩增和保存 | 第47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| ·多杀菌素生物合成基因簇的筛选 | 第48-53页 |
| ·引物设计 | 第48-49页 |
| ·PCR 筛选 | 第49-52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| ·spn 基因簇异源表达载体的构建 | 第53-56页 |
| ·接合转移相关基因的扩增 | 第53-54页 |
| ·Red/ET 重组构建异源表达载体 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 4 总结与讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |