| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-22页 |
| ·小菜蛾及防治 | 第11-14页 |
| ·小菜蛾及生活史 | 第11页 |
| ·小菜蛾的防治及抗性 | 第11-14页 |
| ·精氨酸激酶简介 | 第14-16页 |
| ·精氨酸激酶 | 第14-15页 |
| ·精氨酸激酶基的蛋白性质 | 第15-16页 |
| ·RNA 干扰简介 | 第16-21页 |
| ·RNA 干扰的分子机制 | 第16-18页 |
| ·siRNA 的来源 | 第18页 |
| ·昆虫的 RNAi | 第18-21页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22页 |
| 2 材料、试剂及仪器 | 第22-24页 |
| ·供试昆虫 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·培养基配制 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| 3 试验方法 | 第24-36页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测精氨酸激酶的表达量 | 第24-27页 |
| ·荧光定量 PCR 样品制备 | 第24-26页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的标准曲线构建 | 第26-27页 |
| ·SYBR GreenⅠ定量 PCR 反应条件 | 第27页 |
| ·引物设计及目的片段的合成 | 第27-28页 |
| ·荧光定量 PCR 需要的引物 | 第27-28页 |
| ·构建 dsRNA 表达载体的引物 | 第28页 |
| ·检测载体 RNAi 元件结构完整性的引物 | 第28页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第28-29页 |
| ·感受态大肠杆菌 JM109（CaCl2法）的制备及热击转化 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌转化子的筛选与检测 | 第30-31页 |
| ·DNA 产物的凝胶回收 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 提取 | 第32-33页 |
| ·dsRNA 表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·表达载体转化大肠杆菌 HT115 | 第34页 |
| ·dsRNA 的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌 RNA 的提取 | 第35-36页 |
| ·喂饲试验及 RNAi 效应检测 | 第36页 |
| ·RT-PCR 分析干扰效果 | 第36页 |
| 4 结果与分析 | 第36-54页 |
| ·小菜蛾幼虫总 RNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·精氨酸激酶表达量分析 | 第37-42页 |
| ·目的基因和内参基因克隆以及引物特异性分析 | 第37-38页 |
| ·定量 PCR 的特异性分析 | 第38-39页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的标准曲线 | 第39-41页 |
| ·精氨酸激酶基因周期表达分析 | 第41-42页 |
| ·载体构建及其验证 | 第42-45页 |
| ·构建载体的精氨酸激酶基因的片段的克隆 | 第42-44页 |
| ·克隆载体的验证 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌表达载体的验证 | 第45-47页 |
| ·转化结果的验证以及 dsRNA 的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·喂饲试验以及 RNAi 效应分析 | 第48-54页 |
| ·喂饲试验结果 | 第48-52页 |
| ·RNAi 效应分析 | 第52-54页 |
| 5 讨论 | 第54-56页 |
| 6 后续研究工作的展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66页 |