| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-19页 |
| 1 水稻草状矮化病毒的研究概况 | 第9-15页 |
| ·发生及分布 | 第9页 |
| ·水稻草状矮化病的发病症状及病毒理化特性 | 第9-11页 |
| ·寄主范围以及传毒介体 | 第11页 |
| ·血清学 | 第11页 |
| ·基因组的结构、功能及表达策略 | 第11-14页 |
| ·水稻草矮病的防治 | 第14-15页 |
| 2 杆状病毒的表达系统 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒的生物学特性 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒表达系统的特点 | 第16页 |
| 3 亚细胞定位 | 第16-17页 |
| 4 免疫荧光技术 | 第17-18页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 RGSV 福建分离物基因组全序列获取 | 第19-30页 |
| 1. 材料与方法 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-30页 |
| ·RGSV 福建分离物基因组全序列的获取 | 第26-27页 |
| ·RGSV 编码蛋白的分析 | 第27-30页 |
| 第三章 RGSV 编码蛋白的亚细胞定位分析 | 第30-56页 |
| 1 实验材料 | 第30-32页 |
| ·供试毒源 | 第30页 |
| ·细胞、菌株和载体 | 第30页 |
| ·主要仪器、试剂 | 第30页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第30-32页 |
| 2 pDONR221 入门载体的构建 | 第32-37页 |
| ·水稻病叶总 RNA 的提取 | 第32页 |
| ·cDNA 模板的合成 | 第32-33页 |
| ·目的基因的扩增 | 第33-34页 |
| ·目的基因片段的回收 | 第34页 |
| ·目的片段与入门载体 pDONR221 的连接 | 第34页 |
| ·BP 反应的连接产物转化 DH5α | 第34-35页 |
| ·鉴定与筛选阳性克隆 | 第35-37页 |
| 3 pEarly gate101 瞬时表达载体载体构建 | 第37-39页 |
| ·入门载体酶切回收 | 第37页 |
| ·LR 连接反应产物转化大肠杆菌 | 第37页 |
| ·筛选鉴定阳性克隆： | 第37-38页 |
| ·重组质粒转化进农杆菌 | 第38页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·农杆菌浸润法在本氏烟中进行基因的亚细胞定位 | 第39页 |
| 4 重组穿梭质粒的构建和 sf9 细胞的转染 | 第39-44页 |
| ·入门载体与目的载体进行 LR 反应 | 第39-40页 |
| ·pDEST8 目的载体转化 DH10Bac | 第40-41页 |
| ·重组穿梭质粒的提取 | 第41页 |
| ·重组穿梭载体的质粒 PCR 的验证 | 第41-42页 |
| ·重组穿梭载体质粒的转座与其在 sf9 细胞中的表达 | 第42-44页 |
| 5 结果与分析 | 第44-56页 |
| ·RGSV 各基因片段的扩增 | 第44页 |
| ·RGSV 各个基因与 pDONR221 入门载体的构建 | 第44-45页 |
| ·pEarly gate101 瞬时表达载体载体的 PCR 鉴定 | 第45-47页 |
| ·RGSV 各个基因在本氏烟中的定位 | 第47-50页 |
| ·RGSV 各基因与目的基因 pDEST8 载体的重组鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组穿梭质粒的提取及鉴定 | 第51-52页 |
| ·sf9 细胞的培养 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的表达与 Western blotting 检测 | 第53-54页 |
| ·免疫荧光实验观察 RGSV 编码的蛋白在 Sf9 细胞中的定位 | 第54-56页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第56-60页 |
| 1 全文总结 | 第56-57页 |
| 2 影响实验结果的因素 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
