大观霉素分析检测方法的比较与壮观链霉菌原生质体的制备
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章、文献综述 | 第12-32页 |
| ·大观霉素的研究现状 | 第12-15页 |
| ·大观霉素的产生和发现 | 第12-13页 |
| ·大观霉素的功能及作用机理 | 第13-14页 |
| ·大观霉素的应用 | 第14-15页 |
| ·大观霉素的生产 | 第15-16页 |
| ·壮观链霉菌的菌种选育 | 第16-20页 |
| ·诱变育种 | 第17页 |
| ·原生质体育种 | 第17-18页 |
| ·基因工程育种 | 第18页 |
| ·高效筛选菌株 | 第18-20页 |
| ·大观霉素的检测方法 | 第20-24页 |
| ·微生物检定法 | 第20页 |
| ·分光光度法 | 第20-21页 |
| ·薄层色谱法(TLC) | 第21页 |
| ·高效液相色谱法(HPLC) | 第21-23页 |
| ·气相色谱法(GC) | 第23页 |
| ·免疫测定法(IA) | 第23-24页 |
| ·高效毛细管电泳法(HPCE) | 第24页 |
| ·壮观链霉菌原生质体的制备 | 第24-27页 |
| ·菌龄的影响 | 第24-25页 |
| ·培养基成分 | 第25页 |
| ·酶种类 | 第25页 |
| ·酶浓度 | 第25页 |
| ·酶解时间 | 第25-26页 |
| ·酶解温度 | 第26页 |
| ·酶解pH | 第26页 |
| ·渗透压稳定剂的性质及浓度 | 第26页 |
| ·预处理方式 | 第26-27页 |
| ·本项目研究的目标和思路 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-32页 |
| 第二章 大观霉素分析检测方法的研究 | 第32-55页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-34页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32-33页 |
| ·仪器及设备 | 第33页 |
| ·主要药品 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-38页 |
| ·菌种活化 | 第34页 |
| ·种子制备 | 第34页 |
| ·发酵液制备 | 第34页 |
| ·大观霉素样品预处理 | 第34页 |
| ·微生物管碟法测定大观霉素发酵液 | 第34-36页 |
| ·浊度法Ⅰ测定大观霉素发酵液 | 第36-37页 |
| ·浊度法Ⅱ(二剂量法) | 第37页 |
| ·高效液相色谱-紫外衍生检测法 | 第37-38页 |
| ·在线甲基化衍生气相色谱法 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-53页 |
| ·管碟法 | 第38-41页 |
| ·浊度法Ⅰ | 第41-46页 |
| ·浊度法Ⅱ(二剂量法) | 第46-50页 |
| ·高效液相色谱-紫外衍生检测法 | 第50-52页 |
| ·在线甲基化衍生气相色谱法 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第三章、壮观链霉菌原生质体的制备 | 第55-70页 |
| ·前言 | 第55页 |
| ·材料和方法 | 第55-57页 |
| ·药品和溶液 | 第55-56页 |
| ·培养基 | 第56-57页 |
| ·仪器和设备 | 第57页 |
| ·试验方法 | 第57-59页 |
| ·制备原生质体所需研究菌株的选择 | 第57-58页 |
| ·孢子悬液制备 | 第58页 |
| ·壮观链霉菌的生长曲线测定(采用二级培养) | 第58页 |
| ·甘氨酸对菌体生长的影响 | 第58页 |
| ·壮观链霉菌原生质体的制备及制备率和再生率的计算 | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-69页 |
| ·出发菌株的选择 | 第59-60页 |
| ·培养基中添加不同浓度甘氨酸对菌体生长的影响 | 第60-61页 |
| ·原生质体制备条件的优化 | 第61-67页 |
| ·壮观链霉菌菌丝体的观察 | 第67-68页 |
| ·原生质体的观察 | 第68-69页 |
| ·结论 | 第69页 |
| 参考文献 | 第69-70页 |
| 第四章、谷氨酰胺-氨基环醇氨基转移酶基因的克隆 | 第70-89页 |
| ·前言 | 第70页 |
| ·材料与方法 | 第70-79页 |
| ·菌种与质粒 | 第70-71页 |
| ·仪器与DNA分析软件 | 第71-72页 |
| ·主要药品与试剂 | 第72页 |
| ·溶液 | 第72-73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·引物 | 第73页 |
| ·试验方法 | 第73-79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-87页 |
| ·壮观链霉菌基因组的提取与测定 | 第79-81页 |
| ·PCR方法扩增spcS2基因 | 第81-83页 |
| ·质粒pHZ1272的提取及浓度测定 | 第83-84页 |
| ·质粒pHZ1272及PCR产物双酶切 | 第84-85页 |
| ·重组质粒的获得 | 第85-86页 |
| ·转化子的筛选 | 第86-87页 |
| ·重组质粒提取 | 第87页 |
| ·结论 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-89页 |
| 第五章、结论与建议 | 第89-91页 |
| ·结论 | 第89-90页 |
| ·建议 | 第90-91页 |
| 附录1 (上海生工测序结果) | 第91-92页 |
| 附录2 (上海生工测序结果) | 第92-93页 |
| 附录3 BLAST比对结果 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
