| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-23页 |
| 1.猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第9-17页 |
| 2.原核表达系统研究进展 | 第17页 |
| 3.巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第17-22页 |
| 4.本研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 1.材料 | 第23-26页 |
| ·毒株及细胞 | 第23页 |
| ·菌株及载体 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.方法 | 第26-42页 |
| ·PRRSV美洲型N基因(N_A)和欧洲型N基因(N_E)的克隆 | 第26-30页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·N_A和N_E基因的扩增及回收 | 第26-27页 |
| ·N_A和N_E基因的克隆及鉴定 | 第27-30页 |
| ·N_A和N_E基因及推导编码蛋白相关生物信息学分析 | 第30页 |
| ·双基因融合表达载体pET-32a(+)-N_A-N_E的构建及其表达研究 | 第30-33页 |
| ·pET-32a(+)-N_A-N_E的构建与鉴定 | 第31页 |
| ·融合N蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·融合N蛋白Western blotting分析 | 第32-33页 |
| ·毕赤酵母表达载体pPIC9K-N_A和pPIC9K-N_E的构建及其表达研究 | 第33-42页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·N_A基因的扩增 | 第34-36页 |
| ·N_A基因克隆及鉴定 | 第36-37页 |
| ·pPIC9K-N_A和pPIC9K-N_E的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组表达载体质粒的转化 | 第38-39页 |
| ·毕赤酵母重组子的筛选及鉴定 | 第39-40页 |
| ·阳性重组子诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·表达产物Dot blotting鉴定 | 第41-42页 |
| 3.结果 | 第42-54页 |
| ·N_A和N_E基因的克隆 | 第42-47页 |
| ·N_A和N_E基因的扩增 | 第42页 |
| ·N_A和N_E基因克隆载体的鉴定 | 第42-43页 |
| ·N_A和N_E基因克隆载体序列分析 | 第43页 |
| ·N_A和N_E基因序列分析及相关生物信息学分析 | 第43-47页 |
| ·双基因融合表达载体pET-32a(+)-N_A-N_E的构建及其表达研究 | 第47-49页 |
| ·pET-32a(+)-N_A-N_E的鉴定 | 第47-48页 |
| ·融合N蛋白诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| ·融合N蛋白Western blotting分析 | 第49页 |
| ·毕赤酵母表达载体pPIC9K-N_A和pPIC9K-N_E的构建及其表达研究 | 第49-54页 |
| ·N_A基因的扩增 | 第49-50页 |
| ·N_A基因克隆载体的鉴定 | 第50页 |
| ·N_A基因克隆载体序列分析 | 第50页 |
| ·pPIC9K-N_A和pPIC9K-N_E的鉴定 | 第50-51页 |
| ·毕赤酵母重组子的筛选及鉴定 | 第51-52页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第52-53页 |
| ·表达产物Dot blotting分析 | 第53-54页 |
| 4.讨论 | 第54-59页 |
| ·关于PRRSV N基因及N蛋白 | 第54-56页 |
| ·双基因融合表达载体pET-32a(+)-N_A-N_E的构建及其表达研究 | 第56-57页 |
| ·融合表达设计 | 第56-57页 |
| ·原核表达系统的选择 | 第57页 |
| ·两型N蛋白在毕赤酵母中的分泌表达 | 第57-59页 |
| 5.结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附图 | 第67-69页 |
