| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 材料和方法 | 第12-44页 |
| 1 实验材料 | 第12-23页 |
| ·动物 | 第12页 |
| ·菌株 | 第12页 |
| ·质粒载体 | 第12-17页 |
| ·细胞株 | 第17页 |
| ·试验用工具酶以及DNA,蛋白marker | 第17-18页 |
| ·试剂盒 | 第18页 |
| ·主要化学试剂(按试剂公司分类) | 第18-19页 |
| ·主要仪器及设备 | 第19页 |
| ·分析软件 | 第19-20页 |
| ·实验所用引物 | 第20-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-43页 |
| ·质粒载体的构建 | 第23-27页 |
| ·PCR法扩增目的片段 | 第23-24页 |
| ·PCR点突变SREBP在cidea启动子上的结合位点 | 第24页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| ·DNA及载体的酶切 | 第24-25页 |
| ·片段与载体的连接 | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第26页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第26-27页 |
| ·细胞培养实验 | 第27-31页 |
| ·细胞的培养条件 | 第27页 |
| ·细胞的复苏,传代培养与冻存 | 第27-28页 |
| ·细胞计数与存活测试 | 第28页 |
| ·3T3-L1细胞的培养及诱导分化 | 第28-29页 |
| ·C2C12细胞的培养及诱导分化 | 第29页 |
| ·肝原代细胞的分离以及培养 | 第29-30页 |
| ·转染实验 | 第30-31页 |
| ·重组腺病毒的构建与包装 | 第31-32页 |
| ·腺病毒感染细胞 | 第32页 |
| ·染色体免疫共沉淀实验 | 第32-33页 |
| ·EMSA(electronic mobility shift assay) | 第33-35页 |
| ·DNA、RNA提取及cDNA的合成 | 第35-37页 |
| ·总RNA的提取 | 第35页 |
| ·总DNA和蛋白质的分离提取 | 第35-36页 |
| ·总RNA逆转录合成cDNA | 第36-37页 |
| ·WESTERN BLOT | 第37-39页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| ·SDS-PAGE电泳步骤 | 第38页 |
| ·转膜 | 第38-39页 |
| ·Western印迹杂交 | 第39页 |
| ·免疫荧光染色 | 第39-41页 |
| ·实验用试剂 | 第39-40页 |
| ·实验步骤 | 第40-41页 |
| ·蛋白质免疫共沉淀 | 第41页 |
| ·Real-Time PCR实验 | 第41-42页 |
| ·dual luciferase reporter assay system实验 | 第42-43页 |
| 3. 实验流程 | 第43-44页 |
| 实验结果 | 第44-58页 |
| 1. CIDEA启动子受SREBP1A,1C直接调控激活 | 第44-45页 |
| 2. 染色质免疫共沉淀和电迁移率实验 | 第45-47页 |
| ·染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,CHIP) | 第45-46页 |
| ·电泳迁移率试验 | 第46-47页 |
| 3. SREBP1A,1C在小鼠肝原代细胞,3T3-L1,C2C12细胞中对CIDEA基因的表达调控 | 第47-50页 |
| 4. INSULIN通过SREBP1C调节CIDEA的表达 | 第50-51页 |
| 5. CIDEA对肝脏细胞脂肪代谢的影响 | 第51-54页 |
| ·cidea促进脂滴的增大 | 第51-53页 |
| ·肝细胞中过表达cidea对SREBP1c靶基因表达的影响 | 第53-54页 |
| 6. CIDEA与SREBP1C前体相互作用并通过正反馈调节SREBP1C的活性 | 第54-58页 |
| ·cidea与SREBP1的前体蛋白相互作用 | 第54-56页 |
| ·免疫荧光实验表明SREBP1与cidea在细胞质的共定位 | 第54-55页 |
| ·免疫共沉淀实验证明SREBP1前体蛋白可以与cidea结合 | 第55-56页 |
| ·cidea的过表达不影响SREBP1c成熟体的泛素化降解 | 第56页 |
| ·cidea在细胞内质网上促进SREBP1c的前体蛋白酶解成熟 | 第56-58页 |
| 讨论 | 第58-63页 |
| 小结 | 第63-64页 |
| 第二部分 PGC1A与PPARΓ共激活CIDEC的表达 | 第64-72页 |
| 前言 | 第64-65页 |
| 实验结果 | 第65-69页 |
| 1. PPARΓ与 PGC1A直接结合于CIDEC的启动子而调控转录 | 第65-66页 |
| 2. PPARΓ特异激动剂PIOGLITAZONE可促进CIDEC MRNA的转录 | 第66页 |
| 3. CIDEC过表达的3T3-L1细胞中对脂肪合成以及能量代谢相关基因的影响 | 第66-67页 |
| 4. 在肝脏细胞中过表达CIDEC基因明显增加细胞质脂滴的体积 | 第67-69页 |
| 讨论 | 第69-71页 |
| 小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |
| 综述 | 第80-86页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87-88页 |
