| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-27页 |
| 第一节 RNA沉默的发现史和机制 | 第10-12页 |
| 第二节 RNA沉默抑制子(RNA silencing suppressor,VSR)的抑制机制 | 第12-16页 |
| 第三节 蛋白纯化的原理及方法 | 第16-17页 |
| ·亲和纯化法 | 第16页 |
| ·离子交换层析 | 第16-17页 |
| ·凝胶过滤层析法 | 第17页 |
| 第四节 晶体培养原理 | 第17-18页 |
| ·蛋白质结晶的概念与性质 | 第17页 |
| ·蛋白结晶原理 | 第17-18页 |
| ·蛋白晶体培养 | 第18页 |
| 第五节 原核表达体系 | 第18-20页 |
| 参考文献 | 第20-27页 |
| 第二章:水稻条纹叶枯病毒NS3蛋白的生化性质和结构的研究 | 第27-66页 |
| 第一节 研究背景 | 第27-28页 |
| 第二节 实验目的 | 第28-29页 |
| 第三节 实验材料和方法 | 第29-40页 |
| ·实验材料 | 第29-34页 |
| ·实验方法 | 第34-40页 |
| 第三节 实验结果 | 第40-56页 |
| ·克隆构建 | 第40页 |
| ·蛋白质表达和纯化 | 第40-42页 |
| ·酶切法探索NS3蛋白的结构核心 | 第42-43页 |
| ·NS3蛋白质的聚合状态 | 第43-44页 |
| ·NS3与RNA结合实验条件的探索 | 第44-46页 |
| ·NS3蛋白质结合核酸的特异性 | 第46-47页 |
| ·NS3结合大约10 bp dsRNA | 第47-49页 |
| ·NS3多位点结合20bp和更长的dsRNA | 第49-50页 |
| ·NS3(1-198)的dsRNA结合能力 | 第50页 |
| ·介导NS3与RNA结合的关键氨基酸(突变实验) | 第50-51页 |
| ·NS3可能含有锌指结构 | 第51-56页 |
| 第五节 RHBV的NS3蛋白质的表达与纯化 | 第56-59页 |
| ·亚克隆的构建 | 第56页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第56-58页 |
| ·NS3(RHBV)与dsRNA相互作用 | 第58页 |
| ·晶体筛选 | 第58-59页 |
| 第六节 实验结果讨论 | 第59-64页 |
| ·蛋白表达纯化结果分析 | 第59页 |
| ·NS3与siRNA相互作用 | 第59-60页 |
| ·NS3以二聚体的形式存在并以二聚体的形式结合siRNA | 第60页 |
| ·NS3能够结合长的dsRNA | 第60-61页 |
| ·NS3能够结合单链RNA(ssRNA) | 第61-62页 |
| ·NS3蛋白结合dsRNA的残基 | 第62页 |
| ·锌指结构的检测 | 第62-63页 |
| ·RHBV的NS3结合双链RNA | 第63页 |
| ·晶体筛选结果 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-66页 |
| 第三章 病毒沉默抑制子P26蛋白表达与纯化 | 第66-76页 |
| 第一节 研究背景 | 第66-67页 |
| 第二节 实验目的 | 第67页 |
| 第三节 实验材料和方法 | 第67-68页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·实验方法 | 第68页 |
| 第四节 实验流程 | 第68-73页 |
| ·P26表达克隆的构建 | 第68页 |
| ·蛋白表达P26 | 第68-73页 |
| 第五节 晶体筛选 | 第73页 |
| 第六节 讨论 | 第73-75页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第74页 |
| ·蛋白聚合状态 | 第74页 |
| ·P26蛋白的晶体培养 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-76页 |
| 第四章 黄金葛潜伏病毒P14蛋白纯化与结晶 | 第76-83页 |
| 第一节 研究背景 | 第76页 |
| 第二节 实验目的 | 第76页 |
| 第三节 实验材料与方法 | 第76-77页 |
| ·实验材料 | 第76-77页 |
| ·实验方法 | 第77页 |
| 第四节 实验流程 | 第77-80页 |
| ·克隆的构建 | 第77页 |
| ·P14蛋白表达与纯化 | 第77-79页 |
| ·蛋白聚合状态检测 | 第79页 |
| ·蛋白结合核酸性质的分析 | 第79-80页 |
| 第五节 晶体的筛选 | 第80-81页 |
| 第六节 讨论 | 第81页 |
| ·P14蛋白表达与纯化 | 第81页 |
| ·P14蛋白与dsRNA相互作用 | 第81页 |
| ·晶体筛选 | 第81页 |
| 参考文献 | 第81-83页 |
| 第五章 Dbp8和Esf2蛋白纯化、结晶及生化功能探索 | 第83-100页 |
| 第一节 研究背景 | 第83-84页 |
| 第二节 实验目的 | 第84-85页 |
| 第三节 实验材料和方法 | 第85-86页 |
| ·实验材料 | 第85-86页 |
| ·实验方法 | 第86页 |
| 第四节 实验流程 | 第86-97页 |
| ·实验设计 | 第86-87页 |
| ·克隆构建 | 第87-88页 |
| ·蛋白的表达 | 第88-97页 |
| 第五节 Dbp8和Esf2蛋白相互作用的检测 | 第97页 |
| 第六节 晶体的筛选 | 第97-98页 |
| 第七节 总结与讨论 | 第98-99页 |
| ·蛋白纯化策略 | 第98页 |
| ·Dbp8和Esf2相互作用由RNA介导 | 第98页 |
| ·晶体培养 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
