| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-33页 |
| ·禽流感及禽流感病毒研究进展 | 第11-22页 |
| ·AI 流行情况 | 第11-12页 |
| ·病原 | 第12-13页 |
| ·AIV 分子生物学特性 | 第13-16页 |
| ·禽流感的免疫 | 第16-22页 |
| ·禽流感病毒实验室诊断技术的研究进展 | 第22-28页 |
| ·传统的检测方法 | 第22-23页 |
| ·血清学诊断技术 | 第23-28页 |
| ·神经氨酸酶的结构及其生物学功能 | 第28-31页 |
| ·NA 的结构 | 第28页 |
| ·NA 在病毒复制与扩散中的作用 | 第28-29页 |
| ·不同亚型NA 之间遗传演化的关系 | 第29-30页 |
| ·AIV NA 的免疫学功能及其在流感防治中研究意义 | 第30-31页 |
| ·H5N1 亚型流感病毒在我国的起源、分布和扩散 | 第31-32页 |
| ·论文的研究目的和内容 | 第32-33页 |
| 2 材料 | 第33-40页 |
| ·实验材料及试剂 | 第33页 |
| ·实验仪器 | 第33-34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-40页 |
| 3 实验方法 | 第40-51页 |
| ·化学合成目的基因片段 | 第40页 |
| ·目的基因的扩增 | 第40-42页 |
| ·引物设计 | 第40-41页 |
| ·模板 | 第41页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第41-42页 |
| ·1%晾脂糖凝胶电泳检测目的基因 | 第42页 |
| ·PCR 产物回收(按试剂盒操作说明进行) | 第42页 |
| ·重组质粒(pet28a- NA1)的构建 | 第42-43页 |
| ·pet28a 载体的10uL 的酶切体系 | 第42-43页 |
| ·PCR 产物载体的10uL 的酶切体系 | 第43页 |
| ·酶切胶回收 | 第43页 |
| ·酶切产物连接 | 第43页 |
| ·大肠杆菌BL21 感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的转化 | 第44页 |
| ·重组质粒的小量制备 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第45页 |
| ·PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·酶切鉴定 | 第45页 |
| ·序列测定 | 第45页 |
| ·重组融合表达质粒的诱导表达 | 第45-46页 |
| ·SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳 | 第46-47页 |
| ·Western-Blot 免疫印记检测 | 第47-48页 |
| ·电转印 | 第47页 |
| ·标准蛋白的染色 | 第47页 |
| ·免疫检测 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白表达条件的摸索 | 第48页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第48页 |
| ·超声破菌 | 第48页 |
| ·亲和层析法纯化融合蛋白 | 第48-51页 |
| 4 结果与分析 | 第51-64页 |
| ·PCR 扩增NA1 基因 | 第51页 |
| ·重组质粒的PCR 方法鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组克隆载体的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·序列测定与序列分析 | 第52-58页 |
| ·构建的重组表达载体的序列测定 | 第52-53页 |
| ·核苷酸及其所推导的氨基酸序列与GenBank 上参考毒株的同源性比较 | 第53-58页 |
| ·重组表达载体 pet28a-NA1 转化大肠杆菌 bl21 后的表达条件优 化 | 第58-64页 |
| ·37℃试表达（37℃，诱导时间4h,IPTG 浓度为1Mm/L） | 第58-59页 |
| ·37℃诱导表达融合表达判断 | 第59页 |
| ·16℃度诱导表达——IPTG 浓度摸索 | 第59-60页 |
| ·16℃度诱导表达——可溶性判定 | 第60-61页 |
| ·16℃度加山梨醇诱导表达 | 第61页 |
| ·重组蛋白的亲和层析纯化 | 第61-62页 |
| ·目的蛋白含量测定结果 | 第62-63页 |
| ·Western-blot 结果 | 第63-64页 |
| 5 讨论 | 第64-73页 |
| ·NA1 基因的克隆与扩增 | 第64-65页 |
| ·引物设计的一般要求 | 第64页 |
| ·引物使用及保存 | 第64-65页 |
| ·引物的另一个重要参数是熔解温度 | 第65页 |
| ·确定循环数的基本原理 | 第65页 |
| ·表达载体PET-28A 的确定 | 第65-66页 |
| ·表达载体PET-28A 构建及鉴定 | 第66-68页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素及表达条件的优化 | 第68-69页 |
| ·Western-blot 免疫印记实验检测重组蛋白的特异性 | 第69-70页 |
| ·亲和层析纯化蛋白 | 第70-71页 |
| ·重组NA 蛋白的应用研究 | 第71-73页 |
| 6 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
