| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 前言 | 第17-24页 |
| 选题背景 | 第17-21页 |
| 1.禽传染性支气管炎研究概况 | 第17-18页 |
| 2.禽传染性支气管炎基因工程疫苗研究概况 | 第18-19页 |
| 3.多表位DNA疫苗的研究概况 | 第19页 |
| 4.CpG作为免疫佐剂的研究进展 | 第19-20页 |
| 5.细胞因子作为DNA疫苗佐剂的研究进展 | 第20-21页 |
| 本研究前期工作基础 | 第21页 |
| 存在的问题 | 第21-22页 |
| 本研究的内容及目的意义 | 第22-23页 |
| 本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 第一章 禽传染性支气管炎病毒S1、S2、N蛋白抗原表位预测筛选及多表位嵌合基因克隆 | 第24-46页 |
| 摘要 | 第24页 |
| 1.引言 | 第24-25页 |
| 2.材料与方法 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·数据库、生物信息学软件 | 第25-26页 |
| ·质粒、宿主菌和细胞株 | 第26页 |
| ·工具酶及试剂及主要仪器设备 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-32页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白抗原表位的预测分析 | 第26页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白抗原表位的确定 | 第26-27页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白各抗原表位基因的获取 | 第27页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的拼接 | 第27-30页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的克隆及鉴定 | 第30-32页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的生物信息学分析 | 第32页 |
| 3.结果 | 第32-41页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白B细胞抗原表位的预测结果 | 第32-35页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白T细胞抗原表位的预测结果 | 第35-38页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白各抗原表位基因片段的选择及合成 | 第38页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的拼接结果 | 第38-39页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的鉴定结果 | 第39-41页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的结构特征分析 | 第41页 |
| 4.讨论 | 第41-44页 |
| ·关于IBV的免疫机理 | 第41-42页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白抗原表位的分析及选择 | 第42-43页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白各抗原表位的获取及嵌合基因的拼接 | 第43页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的构建策略 | 第43-44页 |
| ·IBV S1、S2、N蛋白多表位嵌合基因F的生物信息学特征 | 第44页 |
| 5.小结 | 第44-46页 |
| 第二章 禽传染性支气管炎病毒多表位嵌合基因原核表达及ELISA方法的建立 | 第46-65页 |
| 摘要 | 第46页 |
| 1.引言 | 第46-47页 |
| 2.材料与方法 | 第47-53页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·质粒、宿主菌 | 第47页 |
| ·工具酶及试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-53页 |
| ·IBV多表位嵌合基因原核表达载体的构建 | 第48页 |
| ·IBV多表位嵌合基因的原核诱导表达 | 第48-49页 |
| ·IBV多表位嵌合基因原核表达产物的鉴定 | 第49-50页 |
| ·IBV多表位嵌合基因原核表达条件的优化 | 第50-51页 |
| ·IBV多表位嵌合基因重组蛋白的分布 | 第51页 |
| ·IBV多表位嵌合基因重组蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·IBV多表位嵌合蛋白间接ELISA方法的建立 | 第51-53页 |
| 3.结果 | 第53-59页 |
| ·IBV多表位嵌合基因原核表达载体pET-32a-F的鉴定 | 第53页 |
| ·IBV多表位嵌合基因表达产物的SDS-PAGE及Western blots | 第53-54页 |
| ·IBV多表位嵌合基因原核表达诱导时间、浓度、温度的筛选 | 第54-56页 |
| ·IBV多表位嵌合基因重组蛋白的分布及纯化 | 第56-57页 |
| ·IBV多表位嵌合蛋白间接ELISA方法的建立 | 第57-59页 |
| 4.讨论 | 第59-63页 |
| ·IBV多表位嵌合蛋白的表达系统 | 第59-61页 |
| ·IBV多表位嵌合蛋白表达条件的优化 | 第61页 |
| ·IBV多表位嵌合蛋白的回收及活性 | 第61-62页 |
| ·关于IBV多表位嵌合蛋白的间接ELISA方法 | 第62-63页 |
| 5.小结 | 第63-65页 |
| 第三章 禽传染性支气管炎病毒多表位嵌合基因DNA疫苗构建及真核表达检测 | 第65-81页 |
| 摘要 | 第65页 |
| 1.引言 | 第65-66页 |
| 2.材料与方法 | 第66-72页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·质粒、宿主菌和细胞株 | 第66页 |
| ·工具酶及试剂 | 第66-67页 |
| ·主要仪器设备 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-72页 |
| ·IBV结构蛋白多表位嵌合基因真核表达载体的构建 | 第67-69页 |
| ·鸡白介素IL-1β/2/18真核表达质粒的构建 | 第69-70页 |
| ·IBV结构蛋白多表位嵌合基因真核表达检测 | 第70-72页 |
| 3.结果 | 第72-76页 |
| ·pVAX1-F、pcDNA-F、VR1020-F质粒的鉴定 | 第72页 |
| ·pcDNA-IL-1β、pcDNA-IL-2、pcDNA-IL-18质粒的鉴定 | 第72-73页 |
| ·IBV多表位嵌合基因及鸡白介素真核表达转录产物RT-PCR检测 | 第73-75页 |
| ·pVAX1-F、pcDNA-F、VR1020-F质粒表达产物的间接免疫荧光检测 | 第75-76页 |
| 4.讨论 | 第76-80页 |
| ·关于多表位DNA疫苗 | 第76-77页 |
| ·不同载体于体外表达IBV多表位嵌合基因 | 第77-78页 |
| ·关于IBV多表位嵌合基因真核表达质粒的体外转染 | 第78-79页 |
| ·影响外源基因表达的因素 | 第79页 |
| ·IBV结构蛋白多表位嵌合基因的体外表达的检测 | 第79-80页 |
| 5.小结 | 第80-81页 |
| 第四章 禽传染性支气管炎病毒多表位嵌合基因DNA疫苗配制和免疫研究 | 第81-105页 |
| 摘要 | 第81-82页 |
| 1.引言 | 第82-83页 |
| 2.材料与方法 | 第83-89页 |
| ·材料 | 第83-84页 |
| ·菌株、实验动物和攻毒用毒株 | 第83页 |
| ·主要试剂 | 第83页 |
| ·主要仪器设备 | 第83-84页 |
| ·方法 | 第84-89页 |
| ·质粒的制备与纯化 | 第84-85页 |
| ·脂质体的制备、转染效率的检测 | 第85页 |
| ·DNA疫苗的配制 | 第85-86页 |
| ·pVAX1-F、pcDNA-F、VR1020-F、pcDNA-F+IL-1β/IL-2/IL-18 DNA疫苗的免疫原性研究 | 第86-87页 |
| ·IBV多表位嵌合基因DNA疫苗免疫组的攻毒保护性实验 | 第87-88页 |
| ·IBV多表位嵌合基因DNA疫苗的分布及整合安全性检测 | 第88-89页 |
| 3.结果 | 第89-99页 |
| ·质粒的鉴定 | 第89页 |
| ·脂质体的转染效率检测 | 第89页 |
| ·pVAX1-F、pcDNA-F、VR1020-F质粒DNA疫苗免疫原性测定 | 第89-93页 |
| ·免疫后CD4+T细胞亚群的检测 | 第90-91页 |
| ·免疫后CD8+T细胞亚群的检测 | 第91-92页 |
| ·免疫后ELISA抗体效价的检测 | 第92-93页 |
| ·pcDNA-F+IL-1β/IL-2/IL-18 DNA疫苗免疫原性测定 | 第93-96页 |
| ·免疫后CD4+T细胞亚群的检测 | 第93-94页 |
| ·免疫后CD8+T细胞亚群的检测 | 第94-95页 |
| ·免疫后ELISA抗体效价的检测 | 第95-96页 |
| ·攻毒实验结果 | 第96-97页 |
| ·IBV多表位嵌合基因DNA疫苗的分布及整合安全性检测 | 第97-99页 |
| 4.讨论 | 第99-103页 |
| ·DNA疫苗的配制和免疫 | 第99-100页 |
| ·pVAX1-F、pcDNA-F、VR1020-F质粒DNA疫苗的免疫效果 | 第100-101页 |
| ·pcDNA-F+IL-1β/IL-2/IL-18 DNA疫苗的免疫效果 | 第101-102页 |
| ·关于攻毒保护性试验 | 第102-103页 |
| ·关于DNA疫苗的分布和整合可能性 | 第103页 |
| 5.小结 | 第103-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 文献综述 | 第107-124页 |
| 1.禽传染性支气管炎研究概况 | 第107页 |
| 2.禽传染性支气管炎病毒抗原表位研究进展 | 第107-109页 |
| 3.禽传染性支气管炎基因工程疫苗研究概况 | 第109-113页 |
| 4.多表位疫苗的研究概况 | 第113-116页 |
| 5.CpG作为免疫佐剂的研究进展 | 第116-118页 |
| 6.细胞因子作为基因佐剂的研究进展 | 第118-121页 |
| 7.DNA疫苗的组织分布 | 第121-122页 |
| 8.DNA疫苗的整合可能性 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 附录:英汉缩略名词对照表 | 第141-142页 |
| 在读博士期间发表的论文情况 | 第142页 |
