| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-36页 |
| ·概述 | 第13-14页 |
| ·结核菌的致病机制及机体免疫机理 | 第14-18页 |
| ·结核菌的致病机制 | 第14-16页 |
| ·抗结核分枝杆菌感染的免疫机理 | 第16-18页 |
| ·结核分枝杆菌疫苗研究进展 | 第18-23页 |
| ·结核分枝杆菌疫苗开发现状 | 第19-20页 |
| ·传统结核病疫苗存在的问题 | 第20-21页 |
| ·DNA疫苗的研究进展 | 第21-23页 |
| ·DNA疫苗的作用机理 | 第21-22页 |
| ·核酸疫苗的优点及存在问题 | 第22-23页 |
| ·结核病、巨噬细胞与mcl-1 基因 | 第23-25页 |
| ·结核病与巨噬细胞凋亡 | 第23-24页 |
| ·mcl-1 基因与巨噬细胞凋亡 | 第24-25页 |
| ·RNA干扰概述 | 第25-30页 |
| ·RNAi的研究 | 第25-26页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第26-27页 |
| ·RNAi的应用 | 第27-30页 |
| ·RNAi与基因功能研究 | 第28页 |
| ·RNAi与抗肿瘤的研究 | 第28-29页 |
| ·RNAi与结核病的防治 | 第29-30页 |
| ·基因治疗的载体 | 第30-33页 |
| ·腺相关病毒的生物学特性 | 第31-32页 |
| ·AAV Helper-free系统介绍 | 第32-33页 |
| ·本论文的研究意义和主要内容 | 第33-35页 |
| ·本论文的研究意义 | 第33页 |
| ·本论文研究的技术路线 | 第33-35页 |
| ·本论文的创新点 | 第35-36页 |
| 第二章 针对mcl-1 的siRNA设计 | 第36-39页 |
| ·siRNA靶点的选择 | 第36-37页 |
| ·针对mcl-1 的siRNA的设计 | 第37-38页 |
| ·mcl-1 的siRNA作用靶点的选择 | 第37页 |
| ·针对mcl-1 基因设计siRNA | 第37-38页 |
| ·Oligo DNA的合成 | 第38-39页 |
| 第三章 siRNA表达质粒的构建 | 第39-57页 |
| ·实验材料与仪器 | 第39-41页 |
| ·所用设备与仪器 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-51页 |
| ·溶液配制 | 第41-44页 |
| ·细胞培养所用溶液 | 第41-42页 |
| ·提取质粒所用溶液 | 第42-43页 |
| ·制备感受态细胞所用溶液 | 第43页 |
| ·凝胶电泳所用溶液 | 第43-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第44-51页 |
| ·PsiRNA质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·提取结果检测 | 第47-48页 |
| ·PsiRNA质粒酶切 | 第48页 |
| ·酶切后质粒检测 | 第48页 |
| ·插入片段的引入 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的确定 | 第49-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-56页 |
| ·siRNA片断的设计 | 第51-52页 |
| ·psiRNA/mcl-1 质粒的构建及鉴定 | 第52-56页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第52-54页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 siRNA表达质粒抑制效果检测 | 第57-70页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·细胞系 | 第57页 |
| ·主要药品与试剂 | 第57页 |
| ·主要设备 | 第57-58页 |
| ·细胞培养溶液 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-64页 |
| ·重组质粒的纯化 | 第58-59页 |
| ·HepG2 细胞培养 | 第59页 |
| ·HepG2 细胞生长周期 | 第59-60页 |
| ·HepG2 细胞的转染（脂质体法） | 第60-61页 |
| ·Rt-PCR法检测mcl-1mRNA的表达 | 第61-63页 |
| ·总RNA的提取 | 第61页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第61-63页 |
| ·Western-blot法检测mcl-1 蛋白的表达 | 第63-64页 |
| ·蛋白提取 | 第63页 |
| ·电泳与转膜 | 第63-64页 |
| ·封闭杂交 | 第64页 |
| ·发光显影 | 第64页 |
| ·实验结果与分析 | 第64-69页 |
| ·重组质粒的纯化 | 第64-65页 |
| ·HepG2 细胞生长曲线 | 第65页 |
| ·Rt-PCR法检测mcl-1m RNA的抑制效果 | 第65-67页 |
| ·HepG2 细胞中mcl-1 总RNA的提取效果鉴定 | 第65-66页 |
| ·实时荧光定量分析mcl-1m RNA的结果 | 第66-67页 |
| ·Western-blot法检测mcl-1 蛋白表达的抑制效果 | 第67-69页 |
| ·总蛋白电泳 | 第67-68页 |
| ·western blot结果 | 第68页 |
| ·western blot分析mcl-1 蛋白的相对定量 | 第68-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 重组腺相关病毒颗粒的包装 | 第70-78页 |
| ·实验材料 | 第70-71页 |
| ·质粒和细胞 | 第70页 |
| ·主要药品与耗材 | 第70页 |
| ·主要设备与仪器 | 第70-71页 |
| ·溶液配制 | 第71页 |
| ·质粒大量提取所用溶液 | 第71页 |
| ·磷酸钙共转染所用溶液 | 第71页 |
| ·其他溶液 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-73页 |
| ·重组腺相关病毒载体的构建与鉴定 | 第71-72页 |
| ·质粒的大量制备 | 第72页 |
| ·细胞的培养 | 第72页 |
| ·重组病毒的组装 | 第72-73页 |
| ·细胞的接种 | 第72页 |
| ·重组质粒、pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293 细胞 | 第72-73页 |
| ·结果与讨论 | 第73-75页 |
| ·质粒的构建与鉴定 | 第73-74页 |
| ·质粒大量提取的电泳鉴定 | 第74-75页 |
| ·AAV-293 细胞生长曲线的测定 | 第75页 |
| ·AAV Helper-free系统病毒颗粒包装结果 | 第75-77页 |
| ·本章小结 | 第77-78页 |
| 讨论 | 第78-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 总结与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
