| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第10页 |
| ·国内外研究现状 | 第10-19页 |
| ·生物防治植物病害 | 第10-13页 |
| ·木霉菌（Trichoderma）在生物防治上的应用 | 第13-14页 |
| ·木霉菌（Trichoderma）的生物防治机制 | 第14-16页 |
| ·蛋白酶研究进展 | 第16-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统 | 第18-19页 |
| ·课题来源及主要研究内容 | 第19-21页 |
| ·课题来源 | 第19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-38页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·酶与试剂 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·常用贮液 | 第22-23页 |
| ·仪器设备 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-37页 |
| ·菌种的ITS 序列鉴定 | 第24-25页 |
| ·生防相关基因编码区DNA 的获得与生物信息学分析 | 第25-26页 |
| ·胞外表达质粒pPIC9K-mAsp 的构建及其鉴定 | 第26-30页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶基因mAsp 转化整合酵母细胞 | 第30-33页 |
| ·酵母转化子细胞的培养与诱导 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳分析 | 第33-34页 |
| ·重组天冬氨酸蛋白酶酶学特性的研究 | 第34-37页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶粗酶液的抑菌试验 | 第37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 菌种的鉴定及待研基因的功能分析 | 第38-47页 |
| ·菌种的ITS 序列鉴定 | 第38-39页 |
| ·棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶基因DNA 序列的克隆 | 第39-40页 |
| ·生物信息学分析 | 第40-44页 |
| ·信号肽预测 | 第41页 |
| ·蛋白家族预测 | 第41-42页 |
| ·多重序列比对与系统进化树 | 第42-43页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶的三维结构 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·ITS 序列选择及引物的设计原则 | 第44-45页 |
| ·生物信息学分析确定基因功能 | 第45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第4章 重组天冬氨酸蛋白酶在毕赤酵母中的表达 | 第47-57页 |
| ·胞外表达质粒pPIC9K-mAsp 的构建及其鉴定 | 第47-49页 |
| ·胞外表达质粒pPIC9K-mAsp 的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第48-49页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶基因mAsp 转化整合酵母细胞 | 第49-51页 |
| ·重组质粒电转化酵母细胞 | 第49-50页 |
| ·Mut+和Muts转化子的获得 | 第50页 |
| ·筛选阳性转化子 | 第50-51页 |
| ·酵母转化子细胞的培养与诱导 | 第51-53页 |
| ·目的基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳分析 | 第51-53页 |
| ·讨论 | 第53-56页 |
| ·PCR 引物的设计原则 | 第53-54页 |
| ·酵母转化子分子鉴定的技巧 | 第54页 |
| ·重组载体转化巴斯德方法的选择和条件优化 | 第54-55页 |
| ·筛选GS115 转化子两种Mut 表型的看法 | 第55页 |
| ·重组转化子的筛选原则 | 第55-56页 |
| ·诱导培养毕赤酵母转化子的原则 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE 检测目的蛋白 | 第56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第5章 重组蛋白酶的酶学特性及抑菌实验 | 第57-64页 |
| ·酶活标准曲线测定 | 第57页 |
| ·重组子的产酶高峰 | 第57页 |
| ·重组天冬氨酸蛋白的部分酶学特性的研究 | 第57-59页 |
| ·重组蛋白酶酶促反应的最适温度 | 第57页 |
| ·重组蛋白酶酶促反应的最适pH | 第57-59页 |
| ·重组蛋白酶抗病原真菌的初步研究 | 第59-61页 |
| ·毕赤酵母表达棘孢木霉天冬氨酸蛋白酶的讨论 | 第59-60页 |
| ·关于天冬氨酸蛋白酶的活力测定的方法选择及原则 | 第60页 |
| ·两种表型转化子的发酵液酶活力比较 | 第60页 |
| ·重组天冬氨酸蛋白酶抑菌实验 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·重组天冬氨酸蛋白酶抑菌试验结果分析 | 第61-62页 |
| ·提高重组天冬氨酸蛋白酶产率增强抗病原能力的讨论 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
