| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-39页 |
| ·植物14-3-3蛋白的研究进展 | 第16-30页 |
| ·14-3-3蛋白的发现、命名及分布 | 第16页 |
| ·14-3-3蛋白的结构和分类 | 第16-17页 |
| ·14-3-3基因的表达和编码蛋白的定位 | 第17-18页 |
| ·14-3-3蛋白的作用机制及其功能 | 第18-22页 |
| ·植物14-3-3基因家族 | 第22-24页 |
| ·植物14-3-3蛋白的相互作用研究 | 第24-25页 |
| ·植物14-3-3蛋白参与的调控通路 | 第25-30页 |
| ·油菜素内酯的研究进展 | 第30-32页 |
| ·油菜素内酯的发现及命名 | 第30页 |
| ·油菜素内酯与植物生长发育 | 第30页 |
| ·植物中的BR信号通路研究进展 | 第30-31页 |
| ·BR与细胞伸长 | 第31-32页 |
| ·棉花纤维发育的研究进展 | 第32-37页 |
| ·棉花纤维细胞发育模式 | 第32-34页 |
| ·棉花纤维发育分子机制及相关基因的研究进展 | 第34-36页 |
| ·棉花纤维发育与激素水平关系 | 第36页 |
| ·棉花纤维发育与油菜素内酯 | 第36-37页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第37-39页 |
| 第二章 Gh14-3-3基因分离鉴定和蛋白定位 | 第39-55页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·植物材料 | 第39页 |
| ·Gh14-3-3基因的cDNA | 第39页 |
| ·菌种和质粒 | 第39页 |
| ·工具酶 | 第39页 |
| ·化学试剂 | 第39-40页 |
| ·常用储存液 | 第39页 |
| ·常用缓冲液 | 第39-40页 |
| ·常用培养基 | 第40页 |
| ·棉花基因组DNA提取试剂 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增引物及试剂 | 第41页 |
| ·实验器材 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·DNA及蛋白质序列分析 | 第42页 |
| ·棉花无菌苗的培养及材料的收取 | 第42页 |
| ·棉花基因组DNA的提取 | 第42-43页 |
| ·Gh14-3-3基因DNA全长序列的分离克隆 | 第43-45页 |
| ·Gh14-3-3:eGFP载体构建 | 第45-46页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第46页 |
| ·农杆菌介导的棉花转化 | 第46-47页 |
| ·棉花愈伤组织细胞荧光观察 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-53页 |
| ·5个Gh14-3-3 cDNA的分离和鉴定 | 第47页 |
| ·Gh14-3-3蛋白的系统进化分析 | 第47-49页 |
| ·Gh14-3-3基因结构分析 | 第49-50页 |
| ·Gh14-3-3蛋白序列比较及结构分析 | 第50页 |
| ·Gh14-3-3蛋白的亚细胞定位 | 第50-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 Gh14-3-3基因在纤维发育过程中的表达分析 | 第55-65页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第55页 |
| ·化学试剂 | 第55页 |
| ·常用缓冲液 | 第55页 |
| ·棉花总RNA提取试剂 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-59页 |
| ·棉花各组织及纤维各发育时期材料收集 | 第55-56页 |
| ·棉花纤维的离体培养及激素处理 | 第56页 |
| ·棉花各组织/器官的总RNA的提取 | 第56-57页 |
| ·实时定量RT-PCR分析 | 第57-59页 |
| ·实验结果 | 第59-63页 |
| ·Gh14-3-3基因在棉花各组织/器官中的差异表达 | 第59-60页 |
| ·Gh14-3-3基因在野生型和无絮棉开花当天胚珠中的差异表达 | 第60-61页 |
| ·Gh14-3-3基因在棉花纤维中的表达受到发育时期的调节 | 第61-62页 |
| ·Gh14-3-3基因在棉花纤维中的表达受到激素调节 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 Gh14-3-3蛋白的相互作用蛋白的筛选与鉴定 | 第65-92页 |
| ·引言 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第66-68页 |
| ·植物材料 | 第66页 |
| ·菌株与质粒 | 第66页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第66页 |
| ·化学试剂 | 第66-68页 |
| ·实验方法 | 第68-75页 |
| ·酵母双杂交诱饵质粒的构建 | 第68-69页 |
| ·诱饵质粒转化酵母宿主细胞 | 第69页 |
| ·诱饵蛋白自激活及毒性检测 | 第69-70页 |
| ·棉花纤维酵母双杂交cDNA文库构建 | 第70-73页 |
| ·酵母结合实验筛选互作蛋白 | 第73-74页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第74-75页 |
| ·互作蛋白的分析 | 第75页 |
| ·结果 | 第75-88页 |
| ·pGBKT7-Gh14-3-3及pGADT7-Gh14-3-3载体的构建 | 第75-76页 |
| ·诱饵蛋白的自激活实验和毒性检测结果 | 第76-77页 |
| ·5个棉花14-3-3蛋白间选择性地相互作用 | 第77-79页 |
| ·纤维酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第79页 |
| ·酵母结合实验筛选3个Gh14-3-蛋白的互作蛋白 | 第79-80页 |
| ·互作蛋白的酵母回转验证与阳性克隆的测序分析 | 第80-82页 |
| ·14-3-3蛋白的互作蛋白选择性地与14-3-3蛋白相互作用 | 第82-83页 |
| ·棉花14-3-3蛋白与互作蛋白相互作用关键位点的分析 | 第83-88页 |
| ·讨论 | 第88-92页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第88页 |
| ·棉花14-3-3蛋白之间的相互作用 | 第88-89页 |
| ·棉花14-3-3蛋白互作蛋白的筛选 | 第89-90页 |
| ·14-3-3蛋白及互作蛋白发生相互作用的关键位点 | 第90-92页 |
| 第五章 Gh14-3-3蛋白参与棉花BR信号通路 | 第92-104页 |
| ·实验材料 | 第92-93页 |
| ·植物材料 | 第92页 |
| ·菌株和载体 | 第92页 |
| ·化学试剂及其他材料 | 第92页 |
| ·工具酶 | 第92页 |
| ·常用缓冲液 | 第92页 |
| ·SDS植物DNA提取缓冲液 | 第92页 |
| ·常用培养基 | 第92页 |
| ·原核表达及纯化所用试剂及缓冲液 | 第92-93页 |
| ·Western-blot所用试剂和缓冲液 | 第93页 |
| ·实验器材 | 第93页 |
| ·实验方法 | 第93-97页 |
| ·Gh14-3-3e过量表达引物设计和载体构建 | 第93页 |
| ·拟南芥的培养和遗传转化 | 第93-94页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第94页 |
| ·拟南芥总RNA的提取、纯化及逆转录 | 第94-95页 |
| ·Gh14-3-3-His融合蛋白的表达和纯化 | 第95-97页 |
| ·抗体的制备 | 第97页 |
| ·Western-blot分析 | 第97页 |
| ·结果 | 第97-102页 |
| ·Gh14-3-3L和Gh14-3-3e基因的表达水平受到BL的调节 | 第97-98页 |
| ·Gh14-3-3L和Gh14-3-3e蛋白抗体的制备 | 第98页 |
| ·Gh14-3-3e过量表达载体的构建及过量表达转基因拟南芥的鉴定 | 第98-101页 |
| ·Gh14-3-3e过量表达转基因拟南芥对Brz敏感性增强 | 第101-102页 |
| ·油菜素内酯信号途径的相关基因在转基因拟南芥中的表达分析 | 第102页 |
| ·讨论 | 第102-104页 |
| 第六章 Gh14-3-3蛋白在棉花纤维发育过程中的功能 | 第104-119页 |
| ·实验材料 | 第104-105页 |
| ·植物材料 | 第104页 |
| ·菌种和质粒 | 第104页 |
| ·工具酶 | 第104页 |
| ·化学试剂 | 第104-105页 |
| ·实验器材 | 第105页 |
| ·实验方法 | 第105-109页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第105页 |
| ·酵母转化、培养及形态观察 | 第105-106页 |
| ·Gh14-3-3过量表达和RNA i载体的构建及棉花转化 | 第106-109页 |
| ·结果 | 第109-117页 |
| ·在酵母细胞中过量表达Gh14-3-3基因促进酵母细胞纵向伸长 | 第109-112页 |
| ·Gh14-3-3L和Gh14-3-3e基因过量表达和RNA i载体构建和棉花转化 | 第112页 |
| ·Gh14-3-3L和Gh14-3-3e过量表达和RNA i转基因棉花在基因组水平的鉴定 | 第112-113页 |
| ·过量表达Gh14-3-3L和Gh14-3-3e的转基因棉花分析 | 第113-114页 |
| ·过量表达Gh14-3-3L和Gh14-3-3e转基因棉花基因表达分析 | 第114页 |
| ·G14-3-3L和Gh14-3-3e RNAi转基因棉花的表达分析 | 第114-115页 |
| ·在Gh14-3-3L和Gh14-3-3e RNAi转基因棉花中与棉花纤维发育相关基因的表达水平分析 | 第115-116页 |
| ·Gh14-3-3e RNA i转基因棉花纤维细胞的起始发育 | 第116-117页 |
| ·讨论 | 第117-119页 |
| 结论 | 第119-121页 |
| 本论文的主要创新点 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-134页 |
| 附录 | 第134-138页 |
| 博士期间撰写和发表的学术论文 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
