| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 顶复门原虫CDPK的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 疟原虫的CDPKs | 第14-15页 |
| 1.1.2 弓形虫的CDPKs | 第15页 |
| 1.1.3 艾美耳球虫的CDPKs | 第15-16页 |
| 1.2 锌指蛋白的研究进展 | 第16页 |
| 1.3 蛋白质互作研究方法 | 第16-20页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Pull down技术 | 第17页 |
| 1.3.3 双分子荧光互补技术 | 第17-18页 |
| 1.3.4 串联亲和纯化技术 | 第18页 |
| 1.3.5 免疫共沉淀 | 第18-19页 |
| 1.3.6 质谱分析 | 第19-20页 |
| 1.4 展望 | 第20-21页 |
| 第二章 Co-IP联合质谱筛选柔嫩艾美耳球虫CDPK3 相互作用蛋白 | 第21-30页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 实验虫株 | 第22页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第22页 |
| 2.2.4 柔嫩艾美耳球虫子孢子的收集与纯化 | 第22-23页 |
| 2.2.5 柔嫩艾美耳球虫子孢子总蛋白的提取 | 第23页 |
| 2.2.6 免疫共沉淀 | 第23页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE检测 | 第23-24页 |
| 2.2.8 质谱鉴定 | 第24页 |
| 2.2.9 ESI质谱数据分析 | 第24页 |
| 2.3 结果 | 第24-28页 |
| 2.3.1 柔嫩艾美耳球虫子孢子的收集与纯化 | 第24-25页 |
| 2.3.2 柔嫩艾美耳球虫子孢子总蛋白的提取 | 第25页 |
| 2.3.3 免疫共沉淀产物的SDS-PAGE分析 | 第25-26页 |
| 2.3.4 质谱鉴定结果分析获得潜在互作蛋白 | 第26-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 重组质粒的构建及互作蛋白的验证 | 第30-48页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-39页 |
| 3.2.1 实验载体与细胞 | 第30-31页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第31页 |
| 3.2.3 柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.4 柔嫩艾美耳球虫c DNA第一链的合成 | 第31-32页 |
| 3.2.5 Et CHP、Et NDK的 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 3.2.6 Et CHP、Et NDK原核重组表达质粒的构建 | 第33-35页 |
| 3.2.7 Pull-down技术验证Et CHP、Et NDK和 Et CDPK3 的相互作用 | 第35-36页 |
| 3.2.8 Et CHP、Et NDK真核重组表达质粒的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.9 Co-IP与 BiFC技术验证Et CHP、Et NDK和 Et CDPK3 的相互作用 | 第37-39页 |
| 3.3 结果 | 第39-46页 |
| 3.3.1 柔嫩艾美耳球虫子孢子总RNA的提取 | 第39页 |
| 3.3.2 Et CHP、Et NDK基因的克隆 | 第39-40页 |
| 3.3.3 Et CHP、Et NDK原核表达重组质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.4 SDS-PAGE检测Et CHP和 Et NDK在原核表达系统中的表达 | 第41-42页 |
| 3.3.5 Western blot分析GST-Et CHP和 His-Et NDK的表达形式 | 第42-43页 |
| 3.3.6 Et CHP GST pull-down验证 | 第43页 |
| 3.3.7 Et NDK His pull-down验证 | 第43-44页 |
| 3.3.8 Et CHP、Et NDK真核重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.9 Et CHP免疫共沉淀验证 | 第45页 |
| 3.3.10 Et NDK双分子荧光互补验证 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫保守蛋白和锌指蛋白特性的初步分析 | 第48-67页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 材料与方法 | 第48-56页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第48页 |
| 4.2.2 实验虫株和细胞 | 第48页 |
| 4.2.3 主要实验试剂 | 第48-49页 |
| 4.2.4 主要实验仪器 | 第49页 |
| 4.2.5 柔嫩艾美耳球虫4 个发育阶段虫体的收集与纯化 | 第49-51页 |
| 4.2.6 生物信息学分析 | 第51页 |
| 4.2.7 重组蛋白r Et CHP、r Et ZN1-ZnFP的制备与纯化 | 第51页 |
| 4.2.8 抗r Et CHP、r Et ZN1-ZnFP多克隆抗体的制备与血清中IgG的纯化 | 第51-52页 |
| 4.2.9 r Et CHP、r Et ZN1-ZnFP的反应原性分析 | 第52-53页 |
| 4.2.10 Et CHP、Et ZN1-ZnFP基因在柔嫩艾美尔球虫4 个阶段虫体的转录 | 第53-54页 |
| 4.2.11 Et CHP和 Et ZN1-ZnFP在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段的分布 | 第54-55页 |
| 4.2.12 抗r Et CHP、抗r Et ZN1-ZnFP多克隆抗体体外抑制分析 | 第55-56页 |
| 4.3 结果 | 第56-65页 |
| 4.3.1 Et CHP、Et ZN1-ZnFP基因的生物信息学分析 | 第56-58页 |
| 4.3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第58-59页 |
| 4.3.3 多克隆抗体的制备与纯化 | 第59-60页 |
| 4.3.4 重组蛋白反应原性分析 | 第60页 |
| 4.3.5 Et CHP、Et ZN1-ZnFP基因在柔嫩艾美耳球虫四个阶段虫体内的转录 | 第60-61页 |
| 4.3.6 Et CHP和 Et ZN1-ZnFP在不同阶段虫体内的分布 | 第61-63页 |
| 4.3.7 体外抑制分析 | 第63-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫保守蛋白和锌指蛋白的免疫保护实验 | 第67-76页 |
| 5.1 引言 | 第67页 |
| 5.2 材料与方法 | 第67-70页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第67页 |
| 5.2.2 实验虫株 | 第67页 |
| 5.2.3 实验试剂 | 第67-68页 |
| 5.2.4 重组蛋白r Et CHP、r Et ZN1-ZnFP的大量纯化 | 第68页 |
| 5.2.5 免疫保护方案 | 第68-69页 |
| 5.2.6 实验过程动物增重变化 | 第69页 |
| 5.2.7 实验过程卵囊产量变化 | 第69页 |
| 5.2.8 盲肠病变计分 | 第69页 |
| 5.2.9 分化抗原簇4、分化抗原簇8 和细胞因子水平检测 | 第69-70页 |
| 5.3 结果 | 第70-74页 |
| 5.3.1 重组蛋白免疫动物增重变化 | 第70-71页 |
| 5.3.2 重组蛋白免疫动物卵囊产量变化 | 第71页 |
| 5.3.3 重组蛋白免疫动物盲肠病变计分 | 第71页 |
| 5.3.4 分化抗原簇4、分化抗原簇8 和细胞因子水平检测 | 第71-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 全文总结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
